[发明专利]一种牡丹雄蕊多糖的提取分离工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物活性物质的提取与分离，具体是指牡丹雄蕊多糖的提取分离工艺。

背景技术

牡丹原产于中国西部秦岭和大巴山一带，除了作为观赏植物外，还可用于生产丹皮入药，具有改善心血管疾病、镇静、消炎和提高机体免疫力等药效。

多糖在自然界中含量丰富，具有显著的免疫调节作用、抗肿瘤、降血糖及抗病毒作用等，已引起国内外医学界的高度重视，成为近年来研究和应用的热点。民间因牡丹雄蕊茶具有降低血脂、预防和辅助治疗心脑血管疾病等功效而备受人们关注，同时因其对胃肠功能紊乱、便秘有积极的辅助治疗作用，对前列腺炎、前列腺肥大有辅助治疗和恢复作用，被誉为“植物黄金”。 国内外对牡丹雄蕊提取分离及药理作用研究未见文献及专利报道。因此，从牡丹雄蕊中提取分离多糖，可以提升牡丹的应用价值和经济价值，对牡丹的综合利用具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一是从牡丹雄蕊中提取分离多糖。本发明要解决的另一个技术问题是为了获得牡丹雄蕊多糖而采用的系统提取分离工艺方法。为解决上述技术问题，本发明研究制定了如下技术方案。

1) 粉碎：采集牡丹雄蕊，40～50℃烘干后粉碎，过20～100目筛。

2) 细胞破壁：向粉碎的牡丹雄蕊中加入5～15倍量的水，搅拌均匀，置于超低温冰箱中（-20～-40℃）冷冻12～16小时。投入70～90℃水浴锅中解冻，水浴1～2小时。然后200W超声处理10～50分钟，过滤得固形物为破壁雄蕊。

3) 脱脂、除寡糖：破壁后的牡丹雄蕊加入石油醚回流6～8小时，料液比为1︰2～4(W/V)，浸提脱脂，过滤得固形物（脱脂牡丹雄蕊）。向固形物中加入80％乙醇，料液比为1︰2～4(W/V)，回流6～8小时，抽滤，以脱除寡糖。重复1～3次，抽滤得固形物（脱脂、除寡糖后的牡丹雄蕊）。

4) 多糖的提取：向固形物中加入蒸馏水，料液比为1︰10～30(W/V)，加热，温度控制在60～90℃，提取时间为1～5小时，抽滤除去残渣得提取液。重复提取1～5次，提取液合并。

5) sevage法除蛋白：向提取液中加入0.1～0.3倍体积量的sevage试剂(氯仿：正丁醇＝5︰1, V/V)，搅拌20～40分钟，完成后5000 r/min 离心10分钟，取上清液。重复操作3～5次。

6) 透析脱盐及其它小分子化合物：将脱蛋白的多糖溶液移入透析袋中，保留至少1/3透析袋体系的空间。在同等体积的蒸馏水中透析24h，每8h换一次水，以脱盐及除去其它小分子化合物。水溶液减压浓缩得浓缩液。

7) 多糖沉淀和干燥：向浓缩液中加入3～5倍体积95%的乙醇，静置过夜，4800 r/min，离心10分钟，收集沉淀。收集的沉淀经真空冷冻干燥即得牡丹雄蕊粗多糖。

本发明提供了一种牡丹雄蕊多糖的提取分离工艺。该方法利用了牡丹雄蕊多糖溶于水而不溶于醇的性质，采用冻融法和超声破壁、石油醚脱脂、醇沉除杂，sevage法除蛋白，透析脱盐及其它小分子化合物，并以热水溶解提取多糖。方法简便易行，可控；牡丹雄蕊多糖收率可达3.1%，提取率可达62.6%。

具体实施方式

实施例1。

1) 粉碎：采集牡丹雄蕊，45℃烘干粉碎，过40目筛。

2) 细胞破壁：向粉碎的牡丹雄蕊中加入10倍量的水，搅拌均匀，置于超低温冰箱中-80℃冷冻14小时。迅速投入80℃水浴锅中解冻，水浴1小时。然后200W超声处理20分钟，过滤得固形物为破壁雄蕊。

3) 脱脂、除寡糖：破壁后的牡丹雄蕊中加入石油醚回流6小时，料液比为1︰2 (W/V)，浸提脱脂，过滤得固形物（脱脂牡丹雄蕊）。向固形物中加入80％乙醇，料液比为1︰3(W/V)，回流6～8小时，抽滤，以脱除寡糖。重复1次，抽滤得固形物（脱脂、除寡糖后的牡丹雄蕊）。

4) 多糖的提取：向固形物中加入蒸馏水，料液比为1︰10～30(W/V)，加热，温度控制在60～90℃，提取时间为1～5小时，抽滤除去残渣得提取液。重复提取1～5次，提取液合并。

5) sevage法除蛋白：向上清液中加入0.2倍体积量的sevage试剂(氯仿：正丁醇＝5︰1, V/V)，搅拌30分钟，完成后5000 r/min 离心10分钟，取上层水溶液清液。重复操作5次，上清液合并。

6) 透析脱盐及其它小分子化合物：将脱蛋白的多糖溶液移入透析袋中，保留至少1/3透析袋体系的空间。在同等体积的蒸馏水中透析24小时，每8小时换一次水，以脱盐及除去其它小分子化合物。水溶液减压浓缩得浓缩液。

7) 多糖沉淀和干燥：向浓缩液中加入4倍体积95%的乙醇，静置过夜，4800 r/min，离心10 分钟，收集沉淀。收集的沉淀经真空冷冻干燥即得牡丹雄蕊多糖。牡丹多糖收率为3.1%，提取率为62.6%。