[发明专利]一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法

说明书

技术领域

本发明属于林业无性繁殖技术领域，具体涉及一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法。 

背景技术

林业是国民经济的基础产业，在维护生态平衡、改善生态环境、实现可持续发展中有着不可替代的作用。随着我国经济的不断发展，对生态环境的破坏不断加剧，水土流失和荒漠化加剧，同时，木材需求快速增长，国内产量已无法满足，林地用地紧张也日益凸显，培育速生丰产抗逆性强的品种是实现扩大种植面积，减少水土流失，缓解土地矛盾，提高木材产量的有效途径之一，同时也能有效的改善生态环境。近年来，国内相继推出了一批速生丰产、抗逆性强的杨树品种，推动了我国林业的发展。 

响叶杨(Populus adenopoda)是我国特有的速生用材树种，为杨柳科(Salicaceae)、杨属(Populus)的一种喜光阳性树种，落叶乔木，高可达30m，其生长条件要求不严格，一般只要年均温10～20℃，年降水量1200mm，相对湿度20%，光照充足时就能正常生长。响叶杨在我国分布广，在我国南方10多个省，均有分布，具有主干通直、材质细密、不翘不裂，生长快、用途广等特点，是营造短周期工业用材原料林特别是纸浆材原料林的重要树种之一。适应性强，耐贫瘠，耐干旱。目前响叶杨造林大都使用的是实生苗，主要来自未经改良或测定的林分、行道树、孤立木等，遗传品质无保障，林分生产力不高，限制了响叶杨的发展。 

发明内容

本发明的目的是提供一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法。 

本发明直接用茎段作为外植体，取材方便。 

本发明的响叶杨组培苗方法是通过外植体消毒、诱导培养、增殖培养、壮苗及生根培养来实现再生植株幼苗，其具体步骤如下： 

（1）外植体消毒：选用半木质化的健康幼嫩茎段为外植体，用70%的CH₃CH₂OH消毒20-40s后，再用0.1%的HgCl₂浸泡6-8min，然后在无菌条件下用无菌水清洗4-6次，用无菌纱布吸干； 

（2）丛生芽诱导培养：将消毒后茎段切成1-2cm的小段，每段带芽1-2个，放入诱导培养基上，先置于暗培养箱中48-72h，然后放在光照培养箱上光照培养，7d后开始长出不定芽，培养30d，即可长出丛生芽；诱导培养基为MS+6-BA0.5-0.7mg.L^-1+NAA0.02-0.04mg.L^-1； 

（3）丛生芽增殖：切取诱导产生的丛生芽，接种到丛生芽增殖培养基上，直接置于光照培养箱进行光照培养，30d后，产生大量的丛生芽；增殖培养基为MS+6-BA0.2-0.5mg.L-1+NAA0.01-0.03mg.L-1； 

（4）壮苗培养：在丛生芽中切取长度3～5cm长势良好的芽，接种到壮苗培养基上，使其生长成为茎干粗壮的无根苗；壮苗培养基为MS+蔗糖30g.L^-1+琼脂7g.L^-1； 

（5）生根培养：壮苗培养30d后，接种到生根培养基上，三周后，可获得主根粗壮、侧根丰富的幼苗；生根培养基为1/2MS+NAA0.01-0.03mg.L^-1。 

组织培养技术的成功不仅取决于植物本身的遗传特性，还需要合适的 培养基、激素及恰当的培养温度、光照等条件。不同植物品种对组织培养条件的要求有所不同。本发明中的诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基中都加入30g蔗糖，7g琼脂，调pH5.8。本发明中的光照培养箱温度为20-25℃，光照强度为1500-2000Lx，光照时间为12-15h/d。 

本发明的优点和有益效果如下： 

响叶杨采用半木质化的幼嫩茎段诱导产生丛芽成苗，取材方便，操作简单，生长繁殖速度快，可有效提高响叶杨组织培养获得再生植株的效率，能保持亲本的优良特性，种苗成品率高，对其以后遗产改良和遗传转化具有重要意义。 

具体实施方式

以下结合实施例对本发明做进一步的详细描述，但并非对本发明的限制，凡依照本发明公开内容所做的任何本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。 

实施例1 

本发明中的诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基中都加入30g蔗糖，7g琼脂，调pH5.8；光照培养箱温度为20-25℃，光照强度为1500-2000Lx，光照时间为12-15h/d。 

响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法，具体步骤如下： 

（1）外植体消毒