[发明专利]一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法

权利要求书

1.一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法，包括如下步骤：

（1）外植体消毒：选用半木质化的健康幼嫩茎段为外植体，用70%的CH₃CH₂OH消毒20-40s后，再用0.1%的HgCl₂浸泡6-8min，无菌水清洗4-6次，最后用无菌纱布吸干外植体表面的水；

（2）丛生芽诱导培养：将消毒后的茎段切成1-2cm小段，每段带芽1-2个，放入诱导培养基上，先置于暗培养箱中48-72h，然后放在光照培养箱上光照培养，7d后开始长出不定芽，培养30d，即可长出丛生芽；

（3）丛生芽增殖：切取诱导产生的丛生芽，接种到丛生芽增殖培养基上，直接置于光照培养箱进行光照培养，30d后，产生大量的丛生芽；

（4）壮苗培养：在丛生芽中切取长度3～5cm长势良好的芽，接种到壮苗培养基上，使其生长成为茎干粗壮的无根苗；

（5）生根培养：壮苗培养30d后，接种到生根培养基上，三周后，可获得主根粗壮、侧根丰富的幼苗。

2.根据权利要求1所述的一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法，其特征在于：所述诱导培养基为MS+6-BA0.5-0.7mg.L^-1+NAA0.02-0.04mg.L^-1；所述增殖培养基为MS+6-BA0.2-0.5mg.L-1+NAA0.01-0.03mg.L-1；所述壮苗培养基为MS+蔗糖30g.L^-1+琼脂7g.L^-1；所述生根培养基为1/2MS+NAA0.01-0.03mg.L^-1。

3.根据权利要求1或2所述的一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法，其特征在于：所述的诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基中都加入30g蔗糖，7g琼脂，调pH5.8。

4.根据权利要求1或2所述的一种响叶杨茎段组织培养获得再生植株的方法，其特征在于：所述的光照培养箱温度为20-25℃，光照强度为1500-2000Lx，光照时间为12-15h/d。