[发明专利]一种草莓中ABA提取与测定的方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种植物中成分提取与测定的方法，尤其涉及一种草莓中ABA提取与测定的方法。

【背景技术】

脱落酸（Abscisic acid，ABA）是调节植物生长的重要内源激素之一，广泛存在高等植物中。脱落酸能抑制植物细胞分裂和种子萌发，促进芽和种子休眠，以及促进叶和果实的衰老和脱落等。草莓（Fragaria ananassa Duch）属典型的非呼吸跃变型果实，其成熟调控以及采后保鲜困难一直是生产、运输及销售过程中的一个难题。ABA是否对草莓成熟过程起着关键调控作用是当今研究的一个热点。准确测定草莓中ABA的含量，研究其变化规律，对于探索果实成熟及贮藏保鲜具有重要意义。

从植物组织中提取ABA是对其进行定性定量分析的首要步骤，目前主要的提取方法是用80%甲醇溶液过夜浸提，但浸提法存在着浸提时间长，一般需18-23小时，提取步骤复杂，过多的操作影响了ABA的回收率等缺点。所以甲醇浸提法提取ABA总体效率不高，因此改进提取步骤是对ABA进行精细分析的重要研究内容之一。测定植物内源激素的方法众多，近些年比较常用的是高效液相色谱法分析（High performance liquid chromatography,HPLC）。超高效液相色谱（Ultra performance liquid chromatography,UPLC）是在HPLC基础上推出的一种新的液相色谱技术，具有比HPLC更高的分离速度和灵敏度，目前主要应用在蛋白组学、药物分析、环境监测等众多高端领域。但利用UPLC测定分析草莓ABA的研究中还未见报道。

【发明内容】

本发明所要解决的技术问题在于提供一种草莓中ABA提取与测定的方法，不仅具有较高的提取效率，而且建立了采用超高效液相色谱法测定ABA的体系。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：一种草莓中ABA提取与测定的方法，该方法具体操作如下：

（1）标准溶液的制备：称取ABA对照品，之后采用色谱纯甲醇进行溶解并定容以获得标准溶液的母液，该母液的浓度为2.5mg/mL，然后将母液稀释成不同浓度梯度的标准溶液；

（2）提取液的制备：称取草莓果肉，采用液氮将其研磨至粉末状，之后置具塞锥形瓶中，并加入提取溶剂，且每克草莓果肉需加入40mL提取溶剂，剧烈震荡提取5min后，抽滤弃去残渣，将所得滤液置于35℃下减压旋蒸至干，接着加入超高效液相色谱的流动相溶解，收集溶液即得草莓ABA的提取液，将所得提取液过0.22μm滤膜得待测液；

其中，所述提取溶剂的组分及其体积比为：甲醇：乙酸乙酯：甲酸＝50：50：1；

（3）超高效液相色谱检测：

在色谱柱上，以体积比为20：10：70的甲醇-乙腈-0.1%甲酸为流动相，等梯度洗脱分离出ABA，色谱条件如下：

检测仪器：超高效液相色谱仪；

色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18规格为2.1mm×100mm,1.7u m的色谱柱；

流动相：甲醇-乙腈-0.1%甲酸；

流速：0.3ml/min；

检测波长：265nm；

进样体积：10ul；

柱温：30℃；

（4）测定：分别取制备获得的标准溶液及待测液，并采用上述色谱条件进行进样检测，记录色谱图，经过色谱仪器自带软件积分得到峰面积，计算得到待测液中ABA的含量。

进一步地，所述母液保存于-20℃下待用。

本发明一种草莓中ABA提取与测定的方法的有益效果在于：提供了一种适用于草莓ABA提取与采用超高效液相色谱法对提取的ABA提取液进行测定的方法，且该方法大大缩短了从草莓果肉中提取ABA的时间，提高了提取效率，而且在申请人设定的色谱条件下进行超高效液相色谱法测定ABA提取液，具有测定精密度高、灵敏度强、重复性好的特点，且测定的结果准确可靠、试剂用量少，从而大大提高了测定速度和减少了溶剂消耗。

【附图说明】

下面参照附图结合实施例对本发明作进一步的描述。

图1是本发明中ABA标准溶液的超高效液相色谱图。

图2是本发明中实施例一待测液的超高效液相色谱图。

图3是本发明中实施例二待测液的超高效液相色谱图。

【具体实施方式】