[发明专利]一种鸡新城疫、传染性支气管炎二联三价活疫苗及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于畜禽用生物新医药技术领域，尤其是涉及一种鸡传染性支气管炎和鸡新城疫二联三价活疫苗及其制备方法。 

背景技术

传染性支气管炎病毒（IBV）属于冠状病毒科冠状病毒属，能引起一种鸡急性、高度接触性呼吸道传染病，其临床症状主要表现为病鸡呼吸困难、发出罗音、咳嗽、张口呼吸、打喷嚏等，死亡率一般很低，但对各种日龄、性别的鸡均易感染。幼雏鸡感染后常引起输卵管永久性退化；成年肉鸡感染后通常会引起饲料报酬降低、死淘率上升；产蛋鸡感染后通常表会导致产蛋量降低、蛋的品质下降。另外，该病经常并发或继发大肠杆菌葡萄球菌、或霉形体感染，使死亡率大大增加，对养鸡业造成严重危害。 

鸡传染性支气管炎呈世界性分布，但对IBV致病型的划分目前尚没有明确标准，主要是根据病毒对组织的亲嗜性、损害的主要器官和引起的临床症状来确定，其中包括呼吸型、生殖道型、肾型、肠型、腺胃型和变异型等，不同国家和不同地区IBV具有较为显著的地域差异，我国的鸡传染性支气管炎主要为呼吸型和肾型，目前在我国用于预防呼吸型IBV的疫苗株主要包括H120株、M41株等；用于预防肾型IBV的疫苗株主要包括W93株、Ma5株等。 

鸡新城疫病毒（NDV）属于副粘病毒科副黏病毒属，能引起一种鸡的高度接触性、急性、烈性传染病。其病程中常呈现败血症，主要临床特征表现为病鸡呼吸困难，下痢，神经机能紊乱，黏膜和浆膜出血等。各品种鸡和各种年龄的鸡都能感染，幼鸡和中鸡更易感染，死亡率极高，常对禽养殖业造成毁灭性打击。新城疫病毒只有一个血清型,但不同亚群和毒株在毒力、抗原性和致病性等方面存在着明显的差异，这种差异虽然不足于造成免疫失败,但有可能使一些致病毒株在免疫鸡群持续存在，给鸡养殖业带来安全隐患，长期的生产实践证明新城疫La Sota株疫苗对在我国流行的鸡新城疫病毒有特异、广谱的防治效果。 

随着对这两种疾病研究的不断深入，防控措施也得到不断完善，特别是相应 疫苗的成功运用，使得这两种疾病在一定程度上得到了有效控制。但是，在实际生产过程中，IB并未得到有效控制，免疫失败的现象时有发生，其主要原因在于IBV基因组易发生点突变、基因缺失、插入及重组，导致新的血清型和基因型病毒不断出现，据报道，全世界已有30多个血清型，传染性支气管炎病毒血清型众多，这给免疫带来了很大的困难，单一血清型疫苗只能对同型的传染性支气管炎病毒产生免疫力，而对其他型的传染性支气管炎病毒只能提供部分保护或根本不保护，如传统的H52、H120、M41等毒株制备的疫苗对很多地方流行的传染性支气管炎病毒已经不能提供保护作用。迄今为止，市面上一直没有交叉保护力好的传染性支气管炎疫苗，肾型IB几乎得不到控制，目前国内外用于预防肾型传染性支气管炎疫苗的研究较多，但获得的以W93株为代表肾型经典毒株也随着病毒的变异逐渐丧失了对肾型IB的保护，且这些毒株的副反应较大，已经不适合对我国的流行株的防治，因此筛选获得新的具有能有效防治肾型IB的毒株，用于制备多联疫苗就显得尤为重要。与IBV不同的是NDV血清型相对固定，目前我国新城疫预防常用Ⅰ系、Ⅱ系、Ⅲ系等新城疫疫苗，其中La Sota株疫苗对ND的防治效果相对较好，在广谱性上具备一定的优势，尤其是La Sota株疫苗在接种时受母源抗体的影响较低，同时在混合感染时一般不受IBV或其它病毒的干扰，因此常成为多联疫苗制备过程中的最佳选择。 

在我国已有大量关于IBV和NDV二联疫苗的研究报道，但其中极少有关于二联三价疫苗的制备方法的研究，针对肾型IBV和NDV二联三价疫苗的研究更是少之又少。2006年，崔保安（专利申请号：200610018069.2）利用IBV的呼吸型M41株、肾型HN99株以及NDV的La Sota株成功制备了IB/ND二联三价灭活疫苗，但是其是利用甲醛灭活生产的灭活疫苗，其制剂存在着传统灭活疫苗的固有不足，免疫效果较差；2012年，宋新宇（专利申请号：201210594755.X）利用IBV的腺胃型YB160株、呼吸型H120株以及NDV的La Sota株制备了IB/ND二联三价活疫苗，其制品充分发挥了活疫苗的优势，成功的对目前中国流行的腺胃型、呼吸型鸡传染性支气管炎病毒的攻击和新城疫病毒的攻击提供了良好的免疫保护力，但是由于鸡传染性支气管炎存在不同型疫苗之间交叉保护力差的特性，所以该制品对鸡肾型IB的保护能力仍无能为力。为满足我国对肾型IB防治的需要，筛选获得新的具有良好保护力的肾型IBV弱毒并用于制备多联活疫苗就成为 当务之急。