[发明专利]广谱复合微生物杀菌剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物农药技术领域，涉及一种广谱复合微生物杀菌剂及其制备方法。 

背景技术

全球由于农作物病虫害导致的经济损失巨大，化学农药对病虫害的防治和农业生产的发展起到了巨大的推动作用，但是人类对其不加节制的滥用，造成环境污染不断加重，人畜中毒频繁发生，也使害虫抗药性增强。因此，开发使用高效、广谱的环保型生物农药，对于农业的可持续发展、保障人类健康和食品安全、维护生态环境和生物多样性都具有重要意义。国家中长期科技发展纲要中，“环保型农药创制和生态农业”被列为农业发展重点领域，“开发环保型农药创制关键技术”是其优先主题，也是国家十二五科技发展规划中现代农业技术研究中的前沿技术。 

发明内容

本发明的目的是提供一种广谱复合微生物杀菌剂，以解决现有杀菌剂使环境污染不断加重、人畜中毒频繁发生，使害虫抗药性增强的问题。 

本发明的另一个目的是提供该复合微生物杀菌剂的制备方法。 

本发明技术方案如下： 

一种广谱复合微生物杀菌剂，它由以下3种微生物组成原复合孢子粉：苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）GSICC 32807、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus  amyloliquefaciens ）GSICC 32826和寡雄腐霉（Pythiumoligandrum）GSICC 61615。

这3株菌种均从甘肃省工业微生物菌种保藏中心（GSMSC）够得。 

为了更好地实现本发明，广谱复合微生物杀菌剂还含有以下成分，营养物、润湿剂、分散剂、载体材料，各物质的重量配比为： 

原复合孢子粉3%、5%-10%的营养物、5%的润湿剂、15%的分散剂、67%-72%的载体材料，其中营养物为硝酸铵、磷酸二氢钾和腐植酸钾微量元素螯合剂的混合物，润湿剂为十二烷基硫酸钠，分散剂为木质素磺酸钙和亚甲基双萘磺酸钠的混合物，载体材料为高岭土、硅藻土或膨润土。所述硝酸铵、磷酸二氢钾和腐植酸钾微量元素螯合剂的质量比为5.415:2.32:10，所述木质素磺酸钙和亚甲基双萘磺酸钠的质量比为1:1。

一种广谱复合微生物杀菌剂的制备方法，其特征在于它由下列步骤组成： 

1）菌种活化

由于菌种长时间保藏于4℃菌种库中，因此在使用前要进行复活。取权利要求1中3株菌种进行斜面培养，在室温放置1-2天后，分别转接到试管进行斜面培养，在25-28℃温度下菌种复活培养基中培养3天，得到活化菌种；

2）两种细菌孢子粉的制备

将活化好的苏云金芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌两种菌株分别接种到一级液体种子培养基中，在28-30℃温度、转速为180转/分的摇床上培养；然后转接到二级种子摇瓶中, 在28-30℃温度、转速为180转/分的摇床上培养；再转接到细菌发酵罐培养基中，在28-30℃温度、转速为180转/分的摇床上培养；将细菌发酵罐培养基的菌种输送到生产罐中，在28-30℃温度、转速为180转/分的摇床上培养，发酵2-3天，得到液体细菌悬浮液；两种细菌悬浮液经过浓缩低温干燥后，制备成孢子粉，含有效活菌数≥100亿个/克；

3）真菌孢子粉的制备

将活化好的寡雄腐霉斜面培养菌株，接种到一级液体种子培养基中，在25-28℃温度、转速为200转/分的摇床上培养，发酵2-3天；然后转接到二级种子摇瓶中, 在25-28℃温度、转速为200转/分的摇床上培养，发酵2-3天，再转接到细菌发酵罐培养基中，在25-28℃温度、转速为200转/分的摇床上培养，发酵2-3天；将细菌发酵罐培养基的菌种接种到固体发酵培养基中，发酵3-5天，形成大量孢子，将产生孢子的固体发酵培养基浸润在无菌水中，制备孢子悬液，然后将真菌孢子悬液浓缩、低温干燥，制成真菌孢子粉，孢子数≥1×10⁹个/g；

4）复合微生物杀菌剂产品制备

将步骤2和3得到的三种孢子粉按1:1:1的比例混合均匀后，为原复合孢子粉；按照以下比例制成复合微生物杀菌剂产品，原复合孢子粉3%，配合5%-10%的营养物，5%的润湿剂，15%的分散剂，65%-75%的载体材料。

该复合微生物杀菌剂产品中：苏云金芽孢杆菌有效活菌数≥1×10⁹个/g，解淀粉芽孢杆菌有效活菌数≥1×10⁹个/g，寡雄腐霉孢子数≥1×10⁷个/g的广谱复合微生物杀菌剂。