[发明专利]一种合成胸腺法新的方法

权利要求书

1.一种合成胸腺法新的方法，所述方法步骤如下：

步骤1，由Fmoc-Asp-OtBu和合适替代度的Rink Amide MBHA 树脂开始合成Fmoc-Asp(Rink Amide MBHA树脂)-OtBu；

步骤2，根据胸腺法新肽序碳端到氮端的次序，在树脂Fmoc-Asp(Rink Amide MBHA树脂)-OtBu上采用逐一偶联方式或是片段法进行所有氨基酸的连接，得到胸腺法新肽树脂；

步骤3，对胸腺法新肽树脂进行裂解，得到粗肽，经RP-HPLC纯化、转盐、冻干得到胸腺法新。

2.根据权利要求1 所述的方法，其特征是：

其中，步骤1所述的合成，其特征是：

Fmoc-Asp(Rink Amide MBHA树脂)-OtBu是由Fmoc-Asp-OtBu与替代度0.40-0.50mmol/g的Rink Amide MBHA 树脂在DIC/Cl-HOBt作用下生成的

其中，步骤2所述胸腺法新肽树脂，结构如下：

Ac-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Ala-Ala-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Val-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asp(Rink Amide MBHA树脂)-OtBu

其中步骤2所述的偶联方式，其特征是：

在Glu18、Lys19两个氨基酸的偶联时，采用片段法一步偶联完成

其中步骤2所述的偶联方式，其特征是：

在Asp6、Thr12、Leu16、Lys17、Glu18-Lys19等偶联之前的去保护采用混合去保护试剂如哌啶/DMF溶液、DBU/DMF溶液或DBU /哌啶/DMF溶液进行2次去保护反应，且去保护反应时间为第一次15min，第二次去保护反应30min；

其中步骤2所述的偶联方式，其特征是：

在偶联完Asp2并洗涤之后，对肽树脂进行特殊酰化试剂如丙酰氯、丁酰氯、对甲苯磺酰氯等进行封端操作；

其中步骤2所述的偶联方式，其特征是：

偶联完所有氨基酸得到胸腺法新28肽树脂，采用醋酸酐/吡啶进行氮端乙酰化

其中，步骤3所述裂解方式，其特征是：

使用的裂解剂选自：三异丙基硅烷和三氟乙酸，其配置比例为三异丙基硅烷∶三氟乙酸=5∶95（体积比），反应时间为1小时，反应温度为25℃；

其中，步骤3所述RP-HPLC纯化、转盐操作，其特征是：

RP-HPLC纯化、转盐采用反相C18填料制备色谱柱，TFA/乙腈、HOAc/乙腈体系做为流动相进行。

3.根据权利要求1 所述的方法，其特征是：在Glu18、Lys19两个氨基酸的偶联时，采用二肽片段法一步偶联完成，可选用的二肽为：Fmoc-Glu（OtBu）-Lys（Boc）-OH。

4.根据权利要求1 所述的方法，其特征是：在偶联完Asp2并洗涤之后，对肽树脂进行特殊酰化试剂进行封端，其中酰化试剂为非乙酰化的其它酰化试剂，如：丙酰氯、丁酰氯、对甲苯磺酰氯等。

5.根据权利要求1 所述的方法，其特征是：将片段法、加强去保护反应条件、特殊试剂封端等条件联合使用后，显著提高了纯度和收率。