[发明专利]检测鱼类血浆中肉碱含量的高效液相色谱法

权利要求书

1.一种检测鱼类血浆中肉碱含量的高效液相色谱法，其特征在于先用对溴苯乙酰基溴衍生化试剂与样品肉碱进行柱前衍生化反应，然后采用正相高效液相色谱分离检测。

2.根据权利要求1所述的检测鱼类血浆中肉碱含量的高效液相色谱法，其特征在于包括以下步骤：取鱼类血浆样品300μl，加1mL蛋白沉淀剂，混均后，加入400mg无水磷酸氢二钠和氧化银的混合物及400mg无水磷酸二氢钾，漩涡振荡5min，8 000r/min离心5min，吸取上清液600μL再加入衍生化试剂50μL混均后，70℃水浴90min；冷却后进样20μL作HPLC分析。

3.根据权利要求2所述的检测鱼类血浆中肉碱含量的高效液相色谱法，其特征在于：所述蛋白沉淀剂是体积比9∶1的乙腈和甲醇混合液。

4.根据权利要求2所述的检测鱼类血浆中肉碱含量的高效液相色谱法，其特征在于：所述无水磷酸氢二钠和氧化银的混合物中磷酸二氢钠和氧化银质量比为9∶1。

5.根据权利要求2所述的检测鱼类血浆中肉碱含量的高效液相色谱法，其特征在于所述衍生化试剂按以下配制：称取40mg p-BPB于试管中，加入1mL乙腈溶解后，再加入100μL 10%四丁基氢氧化铵混匀即可。

6.根据权利要求2所述的检测鱼类血浆中肉碱含量的高效液相色谱法，其特征在于所述HPLC分析色谱条件为：Kromasil Sil色谱柱，规格250mm×4.6mm，5μm；流动相为乙腈-柠檬酸缓冲液，体积比90∶10，每1000mL流动相中加入0.25mL三乙胺,使用前以0.45μm滤膜减压过滤；流速1.2ml/min；柱温35℃；检测波长260nm；进样量20μl。

7.根据权利要求6所述的检测鱼类血浆中肉碱含量的高效液相色谱法，其特征在于：所述柠檬酸缓冲液按以下配制：称取1.89g柠檬酸溶于约400mL水中，溶解混匀后以水稀释至500mL。

8.根据权利要求7所述的检测鱼类血浆中肉碱含量的高效液相色谱法，其特征在于：所述鱼类包括罗非鱼。