[发明专利]一种定量检测胃蛋白酶原I的时间分辨免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及临床免疫学检测领域，具体涉及一种定量检测胃蛋白酶原I的时间分辨免疫层析试纸条及其制备方法。 

背景技术

胃蛋白酶原（Pesinogen，PG）是胃液中胃蛋白酶的无活性前体，分为胃蛋白酶原I（简称PGI）和胃蛋白酶原II（简称PGII）。血清PG水平反映了不同部位胃粘膜的形态和功能，PGI主要由胃底腺的主细胞和颈黏液细胞分泌，血清PGI含量与胃溃疡、十二指肠溃疡、萎缩性胃炎、胃癌等上消化道疾病有密切关系。PGI/PGII的比率对于判断胃黏膜状态和功能也有较高的临床价值。测定PGI含量检测出十二指肠溃疡、萎缩性胃炎，胃炎，胃癌等其他消化道疾病，供临床检测和体检筛查需要。PGI检测作为非侵入性方法，降低患者痛苦，简便、经济、具有普查价值。 

对于胃蛋白酶原I的检测，目前临床常用的方法包括：乳胶增强免疫比浊法，酶联免疫法（elisa），化学发光法，时间分辨免疫法，但是这些方法都有各自的特点及不足。乳胶增强免疫比浊法，操作简单，可以全自动化，但是，其灵敏度不高，无法实现精确定量；ELISA法和时间分辨免疫法定量准确，但手工操作，过程复杂，且不适合单人份和较小批量检测用。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种定量检测胃蛋白酶原I的时间分辨免疫层析试纸条及其制备方法。采用该免疫层析试纸条，不仅能够提供较高的灵敏度和特异性，操作简单，满足临床检验的需要，而且降低了成本，满足国内市场的需求。 

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案： 

本发明一种定量检测胃蛋白酶原I的时间分辨免疫层析试纸条，该试纸条包括塑料卡壳、底板以及附着于底板上依次相互交错排列的样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，所述结合垫上包被有稀土离子微球标记的胃蛋白酶原I单克隆抗体I；所述包被膜上包被有检测带和质控带，所述检测带固定有识别不同抗原表位的胃蛋白酶原I单克隆抗体II，所述质控带固定有兔抗鼠IgG抗体。 

其中，所述的结合垫优选为聚酯膜，其能够载有足量的稀土离子微球，且遇样品后又能迅速释放微球。 

其中，所述的包被膜优选为硝酸纤维素膜。 

其中，所述包被膜上包被的检测带和质控带相互平行，所述检测带靠近所述结合垫，所述质控带靠近所述吸水纸。 

其中，所述的稀土离子微球选用本领域公知的用于标记抗体的任何镧系元素微球，微球表面带有活性基团，可以连接蛋白、糖类等生物物质，内含荧光素。优选的稀土离子微球的直径为100nm-300nm。 

其中，所述试纸条装于所述塑料卡壳内。 

本发明还提供了一种制备上述试纸条的方法，其包括如下步骤： 

（1）在包被膜的不同位置分别固定识别不同抗原表位的胃蛋白酶原I单克隆抗体II和兔抗鼠IgG抗体，形成检测带和质控带； 

（2）制备稀土离子微球标记的胃蛋白酶原I单克隆抗体I垫，并喷涂在结合垫上； 

（3）在底板上依次相互交错的黏贴上样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，然后切割成宽度为0.5cm大小，装入塑料卡壳。 

其中，所述包被膜的制备方法是：使用含有1%-10%蔗糖的0.01-0.02mol/L的PH为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液，分别将识别不同抗原表位的胃蛋白酶原I单克隆抗体II和兔抗鼠IgG抗体稀释到1mg/ml-1.5mg/ml的浓度，使用定量喷膜仪以1ul/cm的量将二者以0.5cm-1.0cm的间隔喷于硝酸纤维素膜上，35-38℃烘干1-1.5h，加入干燥剂封存备用。 

其中，所述荧光标记的胃蛋白酶原I单克隆抗体I的制备方法包快以下步骤： 

（1）将胃蛋白酶原I单克隆抗体I用0.05mol/L的PH为7.2-7.6的磷酸 盐缓冲液在4℃温度下透析过夜，之后调整浓度为1mg/ml-1.5mg/ml；