[发明专利]一种定量检测胃蛋白酶原I的时间分辨免疫层析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种定量检测胃蛋白酶原I的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于：该试纸条包括塑料卡壳、底板以及附着于底板上依次相互交错排列的样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，所述结合垫上包被有稀土离子微球标记的胃蛋白酶原I单克隆抗体I；所述包被膜上包被有检测带和质控带，所述检测带固定有识别不同抗原表位的胃蛋白酶原I单克隆抗体II，所述质控带固定有兔抗鼠IgG抗体。

2.根据权利要求1所述的一种定量检测胃蛋白酶原I的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于：所述的结合垫为聚酯膜，其能够载有足量的稀土离子微球，且遇样品后又能迅速释放微球。

3.根据权利要求1所述的一种定量检测胃蛋白酶原I的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于：所述的包被膜为硝酸纤维素膜。

4.根据权利要求1所述的一种定量检测胃蛋白酶原I的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于：所述包被膜上包被的检测带和质控带相互平行，所述检测带靠近所述结合垫，所述质控带靠近所述吸水纸。

5.根据权利要求1所述的一种定量检测胃蛋白酶原I的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于：所述的稀土离子微球为球内灌注有时间分辨的镧系元素络合物，且其直径范围为100nm-300nm。

6.根据权利要求1所述的一种定量检测胃蛋白酶原I的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于：所述试纸条装于所述塑料卡壳内。

7.一种制备权利要求1-6任一项所述定量检测胃蛋白酶原I的时间分辨免疫层析试纸条的方法，其特征在于：所述制备方法包括如下步骤：

（1）在包被膜的不同位置分别固定识别不同抗原表位的胃蛋白酶原I单克隆抗体II和兔抗鼠IgG抗体，形成检测带和质控带；

（2）制备稀土离子微球标记的胃蛋白酶原I单克隆抗体I垫，并喷涂在结合垫上；

（3）在底板上依次相互交错的黏贴上样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，然后切割成宽度为0.5cm大小，装入塑料卡壳。

8.根据权利要求7所述的一种制备定量检测胃蛋白酶原I的时间分辨免疫层析试纸条的方法，其特征在于：所述包被膜的制备方法是：使用含有1%-10%蔗糖的0.01-0.02mol/L的PH为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液，分别将识别不同抗原表位的胃蛋白酶原I单克隆抗体II和兔抗鼠IgG抗体稀释到1mg/ml-1.5mg/ml的浓度，使用定量喷膜仪以1ul/cm的量将二者以0.5cm-1.0cm的间隔喷于硝酸纤维素膜上，35-38℃烘干1-1.5h，加入干燥剂封存备用。

9.根据权利要求7所述的一种制备定量检测胃蛋白酶原I的时间分辨免疫层析试纸条的方法，其特征在于：所述荧光标记的胃蛋白酶原I单克隆抗体I的制备方法包括以下步骤：

（1）将胃蛋白酶原I单克隆抗体I用0.05mol/L的PH为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液在4℃温度下透析过夜，之后调整浓度为1mg/ml-1.5mg/ml；

（2）使用0.05mol/L的PH为7.2-7.6的MES活化缓冲液洗涤微球，加入碳二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），终浓度为20mmol/L，室温反应10-20分钟，充分洗涤微球，用0.05mol/L的PH为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液复溶后加入透析过的胃蛋白酶原I单克隆抗体I，使胃蛋白酶原I单克隆抗体I与微球的质量比为1:50-4:50，室温反应2小时，加入含有1%-10%BSA的0.01-0.05mol/L的PH为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液，室温反应30分钟，洗涤微球，用含有0.05%-1%BSA，0.05%-0.1%Tween-20,0.01-0.05mol/L的PH为7.2-7.6的磷酸盐缓冲保存液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以3ul/cm-5ul/cm喷涂于聚酯膜上，避光，在35-38℃烘干1小时，加入干燥剂封存备用。