[发明专利]一种抗禽流感病毒的樟芝发酵菌丝体粗多糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗禽流感病毒的樟芝发酵菌丝体粗多糖的制备方法，尤其涉及樟芝（Antrodia camphorata）Ac001，已于2005 年9月21日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”， 保藏编号为CGMCC No.1460，保藏地址为北京市海淀区中关村北一条13号，中国科学院微生物研究所。 

  

背景技术

关于抗禽流感病毒的樟芝发酵菌丝体粗多糖的制备方法，经检索到的相关专利有：中国专利申请号为99112556.8 灰树花发酵液多糖提取方法， 02136517.2 灰树花发酵工艺及其多糖肽的生产方法，89105471 一种云芝糖肽（PSP）的生产方法，92109345 香菇多糖及香菇菌多糖提取工艺，96109095中国灵芝保健饮料，92111030灵芝营养保健液及其制法，93103116灵芝口服液等专利，这些专利内容大多以提取多糖为主要目的，其中灰树花、云芝和灵芝三种制备的活性物质提取物具有抗肿瘤、抗高血压、降低血糖、抗肥胖、抗肝炎等药效，但对于抗病毒作用鲜有报道，而对于抗禽流感病毒的报道更是没有检索到。 

发明内容

本发明要解决的问题是，针对上述抗禽流感病毒的樟芝发酵菌丝体粗多糖的制备方法以及其制备的发酵提取物的药理作用所存在的不足，提供一种抗禽流感病毒的樟芝发酵菌丝体粗多糖的制备方法。利用本发明的方法提取的樟芝发酵菌丝体粗多糖对禽流感病毒具有明显的抑制作用，并且对正常细胞具有保护作用，且该方法具有工艺简便、成本低、药效好的特点。 

本发明的抗禽流感病毒的樟芝发酵菌丝体粗多糖的制备方法，包括两种制备形式：其一为直接从樟芝发酵全液中菌丝体分离出活性物质；其二为从樟芝固体发酵培养菌丝体中分离出活性物质。由以下步骤组成： 

所述的抗禽流感病毒的樟芝发酵菌丝体粗多糖的制备方法，其特征是，所述樟芝发酵菌丝体粗多糖由下述方法制得：

(1)加热提取：取经液体发酵或固体发酵的樟芝菌丝体放于容器内，加入10-20倍的蒸馏水或纯净水，调整其pH值为8～12，置60～120℃下加热100～240分钟，趁热过滤，滤渣再加入10倍的蒸馏水，重复上述步骤再次加热提取，然后过滤，将两次滤液合并；

(2)减压浓缩：合并收集的滤液，在温度50～70℃，压力0.2～0.6Kg/cm²，真空度为0.02～0.06Mpa的条件下进行减压浓缩，使滤液浓缩至原有体积的1/10～1/20；

(3)除色素：取浓缩后的提取液，用氨水调pH至6.0～8.0，于30～45℃下搅拌，按每10ml滴加1ml～2ml 10 %～30%的H₂O₂，进行脱色10～24h，得到淡黄色液体， 

(4)除小分子化合物：然后利用透析袋，截留分子量3000～5000以上，4℃～10℃条件下透析24h～48h，去除多余的H2O2、小分子化合物。

(5)除脂肪：取上述提取液，装入索氏提取器,石油醚加热回流提取2～6h,待冷却后，弃去石油醚层，回收余下的提取液。 

(6)醇析：在回收的提取液中，加入量为其体积4～8倍的乙醇溶液并不断搅拌，搅拌速度为30～60r/min，10～20分钟后，静置24～48小时进行醇析； 

(7)离心分离：醇析后弃上清液，沉淀物移入离心管中，以转速为3000～5000r/min离心20～30min，离心后弃去上清液，收集离心沉淀物；

(8)收集物干燥：将上述收集的离心沉淀物，在50～70℃温度条件下干燥36～48小时； 

(9)收集物粉碎：取上述烘干的收集物，进行粉碎，经200目筛网过筛后即为樟芝菌丝体粗多糖。

其中，所述的樟芝发酵全液是指樟芝（Antrodia camphorata）发酵液与菌丝体的集合体。 

步骤 所述的樟芝菌丝体是指樟芝（Antrodia camphorata）菌株液体发酵和固体发酵所得的菌丝体 

所述樟芝通过以下步骤进行发酵：

（一）液体发酵

（1）液体种子培养：采用500毫升三角瓶，每瓶装200毫升液体培养基，将10%的樟芝菌种以常规方法接种到装有液体培养基的三角烧瓶内，调节pH为3-8，培养温度为20-35℃，摇瓶转速为80-280r/min，培养7-15天，即可得到樟芝液体种子；