[发明专利]一株能生物合成1,2‑二氢睾内酯(testololactone)的简单青霉及合成方法有效
| 申请号： | 201310400600.2 | 申请日： | 2013-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN104419646B | 公开（公告）日： | 2017-05-24 |
| 发明（设计）人： | 吴洽庆;王玉;杨贝贝;陈曦;朱敦明;马延和 | 申请（专利权）人： | 中国科学院天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;C12P33/20;C12R1/80 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300308 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一株能 生物 合成 二氢睾 内酯 testololactone 简单 青霉 方法 | ||
1.简单青霉(Penicillium simplicissimum)WY134-2，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.8017。
2.权利要求1所述简单青霉WY134-2的发酵培养方法，其包括以下步骤：
1)种子培养
将简单青霉(Penicillium simplicissimum)WY134-2接入灭菌后的种子液体培养基中，于30℃，200～300r/min培养16h～20h，得到种子液，
液体培养基的配制如下：葡萄糖30g/L，玉米浆干粉10g/L，NaNO32g/L，KCl0.5g/L，K2HPO4·3H2O2g/L，KH2PO41g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，FeSO4·7H2O0.02g/L，pH6.2；
2)发酵培养
将步骤(1)得到的种子液体按接种量3～5％接种到发酵培养基中进行发酵培养，培养条件：30℃，摇床转速200～250r/min，发酵时间16～20h，即得到菌体的发酵液，
所述发酵培养基的成分为：葡萄糖30g/L，玉米浆干粉10g/L，NaNO32g/L，KCl0.5g/L，K2HPO4·3H2O2g/L，KH2PO41g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，FeSO4·7H2O0.02g/L，pH8.0。
3.一种制备1，2-二氢睾内酯(testololactone)的生物合成方法，其特征是，以孕甾-4-烯-3，20-二酮或17β-羟基-雄甾-4-烯-3-酮或3β-羟基-5-雄烯-17-酮或17α-羟基孕甾-4-烯-3，20-二酮为底物，利用权利要求1所述简单青霉菌株通过如下步骤实现1，2-二氢睾内酯的制备：将1～3g/L上述底物加入到简单青霉菌发酵液中，于28～31℃，250r/min条件下，转化24～48h终止反应，加入浓盐酸调节pH至1.0～2.0，40℃，振荡24h，用乙酸乙酯萃取发酵液数次，合并萃取液，干燥，减压浓缩，浓缩后采用硅胶色谱柱分离得到1，2-二氢睾内酯。
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