[发明专利]检测脂蛋白（a）的免疫比浊试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫比浊的检测方法，尤其涉及检测脂蛋白（a）的免疫比浊试剂盒及其制备方法。

背景技术

脂蛋白（a）快速检测酶免试剂盒，可用于人尿液、血浆和血清检测。见于动脉粥样硬化性心脑血管病、急性心肌梗死、家族性高胆固醇血症、糖尿病、大动脉瘤及某些癌症等。 

脂蛋白(a)由肝脏合成，是一组与纤溶酶原有显著同源性的糖蛋白，其受个体遗传基因的影响，呈现相对分子量大小不一的多态性。脂蛋白(a)为动脉硬化的独立危险因子。血清脂蛋白(a)含量主要由遗传决定，不受饮食、性别和年龄的影响，并与其他脂蛋白、载脂蛋白无关。脂蛋白(a)含量增高者心、脑动脉硬化的发病率明显高于正常者。脂蛋白(a)的水平可预测冠心病的转归，与急性心肌梗死的病程演化关系密切。脂蛋白(a)的正常参考范围为10～140mmol/L（0～300毫克/L）。脂蛋白(a)增高可见于急性心肌梗死，缺血性心、脑疾病，动脉硬化症，高脂血症，糖尿病，慢性肾功能不全，冠状动脉搭桥后再狭窄，大动脉瘤及某些癌症。减低则见于肝脏疾病、酗酒、摄入新霉素等药物后。 

颗粒增强免疫透射比浊法（particle—enhanced turbidimetric immunoassay，PETIA）是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测方法，其基本原理是一定粒径胶乳颗粒的表面交联单克隆或多克降抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应体系的吸光度。这种改变与被测抗原的浓度有一定的相关性，在一定范闹内可以反映被测抗原的浓度。此技术通过颗粒增强的方式，放大了抗原抗体反应，弥补了普通透射比浊法灵敏度不够的缺点，同时又继承了透射比浊法稳定性好、方便快速的优点，克服了ELISA和RIA方法的缺点，已越来越广泛应用于临床上各种微量蛋白的定量检测。日前，颗粒增强免疫透射比浊法广泛用于肾功能检测、心脑血管功能检测检测、糖尿病检测和脂类检测等，取得了良好的社会效益。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测脂蛋白（a）的免疫比浊试剂盒及其制备方法。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：

检测脂蛋白（a）的免疫比浊试剂盒，特点是：包括盒体、应用液瓶、抗体悬浮液瓶和标准品瓶，所述应用液瓶、抗体悬浮液瓶和标准品瓶放置于盒体内，所述应用液瓶中装有应用液，应用液的组分及其重量百分比为：表面活性剂0.01%~1%，增敏剂0.1%~1%，防腐剂0.01~0.5%，氯化钠1%~20%，缓冲液20~200mmol/L；所述抗体悬浮液瓶中装有包被脂蛋白（a）单克隆抗体的乳胶悬液，乳胶悬液的组分及其重量百分比为：包被脂蛋白（a）单克隆抗体的乳胶0.05%~0.5%，表面活性剂0.01%~1%，防腐剂0.01~0.5%，缓冲液20~200mmol/L；所述标准品瓶中装有脂蛋白（a）标准品。

进一步地，上述的检测脂蛋白（a）的免疫比浊试剂盒，所述应用液中的表面活性剂为Triton-X100、Triton-X405、Tween-20、Tween-40或Tween-80；所述应用液中的增敏剂为聚乙二醇2000，聚乙二醇4000，聚乙二醇6000或聚乙二醇8000；所述应用液中的防腐剂为叠氮钠或Proclin-300或两者混合物；所述应用液中的缓冲液为磷酸盐、碳酸盐、三羟基氨基甲烷或甘氨酸。所述乳胶悬液中的表面活性剂为Triton-X100、Triton-X405、Tween-20、Tween-40或Tween-80；所述乳胶悬液中的防腐剂为叠氮钠、Proclin-300或两者混合物；所述乳胶悬液中的缓冲液为磷酸盐、碳酸盐、三羟基氨基甲烷或甘氨酸。

本发明检测脂蛋白（a）的免疫比浊试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

a）制备乳胶悬液：在磷酸盐缓冲液中将乳胶微球与包被脂蛋白（a）单克隆抗体混匀，30~40度旋转反应过夜，用清洗储存液进行清洗得到乳胶悬液，置于2~8度环境下保存；

b）制备应用液： 将表面活性剂、增敏剂、防腐剂、氯化钠和缓冲液同溶于水，得到应用液；

c）配制脂蛋白（a）标准品：选用脂蛋白（a）标准品，由缓冲液稀释成浓度为1000mg/L。