[发明专利]一种靶向人CD47-SIRPα信号通路的双特异性抗体及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，具体涉及一种抗人类整合素相关蛋白(CD47或IAP)和人信号调节蛋白α(SIRPα)的双特异性抗体及其制备方法和用途。

背景技术

CD47，又称整合素相关蛋白(Integrin-associated protein，IAP)，最初从人胎盘与整合素aVβ₃共纯化及从血小板与β₃整合素共免疫沉淀而为人们所认识，其功能与整合素相关(Johansen and Brown.J Biol Chem.2007)。它是一种广泛表达于细胞表面的糖基化跨膜蛋白，属于免疫球蛋白超家族。结构上包括一个氨基端细胞外可变区域，一个有3-5个高度疏水的跨膜片段构成的跨膜区域和一个亲水的羧基端胞质尾区。CD47是细胞表面至关重要的标记物，分子量在47-55kD之间，与GPA(血型糖蛋白A，Glycophorin A)、GPB(血型糖蛋白B，Glycophorin B)、带3蛋白(Band3protein)、RhD(Rh antigen D)等相关蛋白紧密相关(Barclay and Brown.Nat Rev Immunol.2006)。

SIRPα，信号调节蛋白α(Signal regulatory proteinα)也是一种跨膜蛋白，主要表达于巨噬细胞、树突状细胞和神经细胞表面。其胞外区含有3个免疫球蛋白超家族样区域，其中N末端的区域介导与CD47的结合，而其细胞内结构域具有典型的免疫受体酪氨酸抑制性序列(Immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif，ITIM)；与CD47结合后，SIRPα的ITIM被磷酸化，产生级联反应，抑制巨噬细胞的吞噬作用(Matozaki et al.Trends Cell Biol.2009)。

在人体的固有免疫系统(Innate immune system)中，巨噬细胞(Macrophage)扮演着“清道夫”的角色，它通过吞噬作用清除病原物、受损细胞和衰老细胞维持机体健康；同时，巨噬细胞又能识别正常健康细胞，使其免于被自我攻击。这种识别的机制正是在于正常健康细胞如红细胞(Oldenborg et al.Science.2000)或血小板(Olsson et al.Blood.2005)表面的CD47分子与巨噬细胞上的受体SIRPα相互作用产生抑制性信号，抑制其吞噬活性。所以CD47在红细胞和血小板上是一种“自身细胞的标记物”(Marker of self)。

CD47和SIRPα形成的信号复合体，还可参与神经系统发育、中性粒细胞趋化激活和基质细胞支持的造血细胞生成等多种生理活动，共同调节效应细胞的功能和其所分泌的细胞因子，同时在诱导T细胞免疫耐受、活化、凋亡等方面也发挥着多种调节作用(Johansen and Brown.J Biol Chem.2007)。

近年来，CD47和CD47-SIRPα信号系统受到广泛关注。其中，最令人瞩目的是其作为肿瘤治疗的潜在药靶。已有研究证实，CD47在许多恶性肿瘤中，如急性髓细胞性白血病(AML)、B细胞和T细胞急性白血病、非霍奇金淋巴瘤等，均呈过表达状态，且CD47高表达与临床预后差有关(Willingham et al.Proc Natl Acad Sci U S A.2012；Majeti et al.Cell.2009)。CD47作为卵巢肿瘤细胞标记物第一个被克隆，这表明它可能在阻止其他肿瘤组织的吞噬作用中同样发挥作用(Majeti et al.Cell.2009)。肿瘤细胞表面高表达的CD47被巨噬细胞表面的SIRPα识别，向巨噬细胞传递“别吃我”(“Don’t eat me”)的信号，借以逃避免疫监视。