[发明专利]一种乙酰化灵芝多糖及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及食用菌多糖结构改造技术领域，具体地涉及一种乙酰化灵芝多糖及其制备方法。

背景技术

多糖是由10个以上单糖通过糖苷键连接而成的聚合体，是生物体内除蛋白质和核酸外又一类重要的生物大分子，多糖的结构因素包括多糖的主链性质、支链性质和多糖分子的高级结构，其中多糖主链的糖单元组成、糖苷键类型均直接决定了多糖的活性，多糖支链的类型、聚合度、支链在多糖链上的分布及其取代度决定了多糖活性的大小，因此为提高或是改变多糖的生物活性，多糖的分子修饰和结构改造具有重要意义。

灵芝是一种营养、保健价值极高的大型担子菌，素有“仙草”之誉，是中医药学宝库中的珍品。国内外的大量研究结果表明，灵芝具有广泛的药理作用，如抗肿瘤活性、增强免疫功能、抗病毒以及抗突变、降血脂、降血糖等功效，且毒性极低。目前尚未有灵芝多糖乙酰化相关的专利。 

发明内容

本发明首先提供了一种乙酰化灵芝多糖，其是用如下方法制备得到的：

灵芝子实体进行水提、透析和离子交换柱层析，得到灵芝多糖；

对灵芝多糖进行乙酰化修饰。

具体的说，本发明的一种乙酰化灵芝多糖，是用如下方法制备得到的：

灵芝子实体用80-120℃水进行提取；然后将水提液通过透析袋进行透析；然后进行阴离子交换柱层析，浓缩干燥得到灵芝多糖；

将灵芝多糖用乙酸酐-吡啶法进行乙酰化修饰。

更具体的说，本发明的一种灵芝多糖乙酰化衍生物，是用如下方法制备得到的：

将灵芝子实体粉碎、80-120℃水热水提取，得到灵芝粗提物水提液；

灵芝粗提物水提液通过透析袋透析，冷冻干燥得到灵芝粗提物干品；

将灵芝粗提物干品配制成10-40mg/mL的水溶液，10000rpm，离心30min，取上清10-50mL用阴离子交换柱层析纯化；

阴离子交换柱层析纯化具体的说是采用?KTA层析系统，先以蒸馏水洗脱，再以0-2mol/L的NaCl梯度洗脱，流速4mL/min，分部收集，以苯酚-硫酸法逐管检测每管的多糖含量，根据多糖的洗脱曲线合并各峰，然后浓缩、透析、干燥得离子柱分离的组分；

称取离子柱层析所得组分，按1:200-400（w/v）加入二甲基亚砜，超声波振荡后室温静置30分钟，按1:1-10（w/v）加入吡啶，按照1:10-20（w/v）加入N,N二甲基氨基吡啶的乙腈，再按1:1-15（w/v）加入乙酸酐，置于30℃反应0-8h，取出后加水终止反应，并转移至透析袋中，分别用自来水透析1天，蒸馏水透析2天，冷冻干燥得到灵芝多糖的乙酰化衍生物。

其中所述的透析袋截留量为3000-3500Da；

其中所述的阴离子柱层析，为DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子柱层析。

本发明还提供了制备上述灵芝多糖乙酰化衍生物的方法，该方法为：

灵芝子实体进行水提、透析和离子交换柱层析，得到灵芝多糖；

对灵芝多糖进行乙酰化修饰。

多糖乙酰化修饰是一种重要的修饰方法，多糖的乙酰化可以改变多糖分子的定向性和横向次序，从而改变多糖的物理性质，乙酰基的引入使分子的伸展发生变化。本发明制得的乙酰化灵芝多糖未改变多糖的单糖组成，但单糖含量发生变化，同时乙酰化修饰后的灵芝多糖组织状态和溶解性均发生了变化，这为提高或改变多糖的生物活性，扩大灵芝的应用范围，提高灵芝的利用率都具有非常重要的现实意义和学术价值。

本发明采用乙酸酐-吡啶法制备的灵芝乙酰化衍生物具有显著的刺激巨噬细胞产生NO的作用，且刺激巨噬细胞产生NO活性的能力与乙酰化的取代度有关，取代度为0.98时活性最高产生NO量为38.22μmol（浓度25μg/mL）。

具体实施方式

本发明使用的灵芝子实体由上海市农科院食用菌所提供；

本发明使用?KTA层析系统、填料DEAE-Sepharose Fast Flow均购自美国通用电气公司；

本发明使用其他试剂均购自国药集团化学试剂有限公司（上海）

实施例1

将灵芝子实体粉碎后，按照1kg子实体加入15L水的比例加水浸泡30分钟后，加热煮沸，于100℃提取2小时，过滤，滤渣按料液比1:15加水再提取一次，合并滤液，滤液浓缩后透析，冷冻干燥，得灵芝粗提取干品。