[发明专利]木霉T11-W对根结线虫卵的寄生及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及木霉T11-W对根结线虫卵的寄生及其应用。

背景技术

植物寄生线虫是一类重要的植物病原物，其危害超过细菌和病毒，仅次于真菌病害。据估计全球每年由于植物寄生线虫所造成的损失达1250亿美元，这一损失的70%是由根结线虫（Meloidogyne spp.）所造成。根结线虫寄主范围广，繁殖力强，侵染作物后可造成作物大幅减产，甚至绝产，已成为制约我国农业可持续发展的突出问题之一。因此，根结线虫的防治日益受到人们的重视。但由于以往多使用高毒化学农药防治植物线虫，给环境、人类健康带来了很多负面影响， 致使人们将防治重点转向了生物防治。在植物线虫生防研究中，由于寄生性线虫真菌是一类重要的植物线虫抑制因子，所以成为了许多线虫生防专家的研究对象。已报道的寄生植物线虫真菌主要种类有淡紫拟青(Paecilomyces lilacinus)、厚垣孢普可尼亚菌(Pochonia chlamydosporia)、洛斯里被毛孢（Hirsutellarhossiliensis）和明尼苏达被毛孢（H.minnesotensis）（李玉中，李本祥，等.寄生线虫真菌黑葡萄穗霉的分离与鉴定[J].广东农业科学，2011，16：59-60）。而木霉（Trichoderma spp.）作为线虫寄生性真菌的报道鲜见。木霉是土壤中常见的生防菌，哈茨木霉菌（Trichoderma harzianum）是木霉菌中现应用最为广泛的一种，可防治立枯病、猝倒病、根腐病等真菌性病害。虽然已有报道说哈茨木霉Snef85的次级代谢产物对根结线虫幼虫有毒杀做用（段玉玺，靳莹莹，王胜君，等. 生防菌株Snef85的鉴定及其发酵液对不同种类线虫的毒力[J].植物保护学报，2008，35（2）：132-136），但哈茨木霉对蔬菜根结线虫卵的寄生作用未见报道。因木霉具有腐生习性，很难区别其对根结线虫卵是寄生还是腐生作用，本发明采用生物测定和染色相结合的方法确定T11-W对根结线虫卵具有寄生性。

根结线虫卵寄生菌T11-W是从黄瓜根结线虫卵上分离获得，菌种保藏号CGMCC NO.7938，经鉴定是哈茨木霉（Trichoderma harzianum）。T11-W是一种具有应用潜力的线虫生防真菌，不但能够寄生根结线虫卵，消解卵壳，还能够定殖植物根系并能促进植物根系的生长。

发明内容

   本发明提供一种对根结线虫卵有高效寄生率的菌株及其应用。

本发明中的根结线虫卵寄生菌T11-W的分离及鉴定

（1）菌株采用双抗PDA平板筛选方法，从黄瓜根结线虫病根分离所得。

（2）菌株鉴定：采用ITS序列比对的方法将该菌株鉴定为哈茨木霉（Trichoderma harzianum），命名为T11-W，该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC），保藏，其保藏号为CGMCC NO.7938，保藏时间为2013年7月19日，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

2 T11-W对番茄根结线虫卵寄生研究

本发明采用生物测定和染色相结合的方法研究T11-W对根结线虫卵的寄生性。结果见表1、图1和图2。

由表1可知，木霉菌T11-W处理根结线虫卵10天后的校正寄生率为73.46%，孵化抑制率为91.16%。表明，T11-W是根结线虫卵的高效寄生菌。

由附图1和附图2可知，木霉菌T11-W对根结线虫卵有寄生性。因为附图1中的卵是健康的卵（健康的卵不着色），T11-W菌丝刚开始接触到健康的卵；附图2中的卵是被T11-W菌丝寄生并致死的卵。

3. 木霉菌T11-W分生孢子的培养方法

   将木霉菌株T11-W接种于PDA平板， 置于28℃下培养2-3天。转接PDA液体培养基，置于摇床上28℃振荡培养3-4天，然后将液体种子接入麸皮和稻壳组成的固体基培养5-7天。自然风干，得T11-W固体培养物。过100目筛收集分生孢子粉。

4. T11-W制剂研究与应用

本发明T11-W菌株在农业上的应用是防治土传的线虫病害，特别是蔬菜的根结线虫病害。这决定了该菌剂的施药方式为浇施、撒施或穴施。综合考虑多方面因素选择以T11-W分生孢子粉为有效成分配制一种可湿性粉剂，组成如下：