[发明专利]结核感染T细胞免疫的四聚体检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生命科学领域，具体为一种针对结核感染T细胞免疫的四聚体检测方法。

背景技术

目前常用的对结核感染T细胞免疫的检测方法有痰涂片检查、痰培养，这种方法的检测周期长，痰液培养过程操作存在一定的传染风险；另外，还有X-ray、CT等检测方法，这些方法如果使用过于频繁，会对病人有一定的损伤。

发明内容

为了解决核感染T细胞免疫检测的周期过长、安全性差的问题，本发明提供一种检测方法，其采用的技术方案为： 从全血样本中分离出外周血单个核细胞，即PBMCs，将其与结核杆菌特异性抗原一起孵育，当外周血中存在针对结核杆菌的效应T淋巴细胞时，结核杆菌特异性抗原中的TCR与MHC-多肽复合物结合，借助生物素-链霉亲和素系统，将MHC-多肽复合物形成四聚体分子，单个MHC-多肽四聚体分子与T细胞表面的多个TCR结合，以提高了MHC-多肽复合物与TCR的亲和力和稳定性；再加入生物素标记的检测抗体标记有PE荧光染料；最后通过流式细胞仪对特异T细胞进行计数以对结核病进行辅助诊断。

本发明采用以上技术方案的有益效果是：首先，产品中含有能够和抗原特异性T细胞上TCR结合的4个MHC-多肽分子，使其与TCR的亲和力大大提高。因此少量的样本量，较低的T细胞比例，依然可以使用该产品进行检测，提高了检测灵敏度和准确性；其次，利用基因工程手段，在不影响与抗原特异性T细胞结合能力的前提下，将MHC中与CD8分子相作用的区域进行人为突变，打打降低了MHC与CD8的非特异性结合，提高了产品特异性；再者，能根据客户的检测习惯，选用不同的荧光染料进行标记，常用的PE、APC都可方便应用；最后，本方法为体外检测，方便快捷，无需另外培养痰液，对病人身体无损伤。

具体实施方式

本发明应用结核分枝杆菌特异性抗原对待检者全血中分离出的T细胞进行体外刺激，感染了结核分枝杆菌的待检者的T细胞可对这种体外刺激产生特异性的反应，变成特异性效应T细胞，再通过T细胞上的TCR与MHC-多肽复合物四聚体特异结合，对结核特异性效应T细胞进行检测，并对其反应进行计数，从而判断待检者是否感染结核分枝杆菌。具体的方法为：从全血样本中分离出外周血单个核细胞，即PBMCs，将其与结核杆菌特异性抗原一起孵育，当外周血中存在针对结核杆菌的效应T淋巴细胞时，结核杆菌特异性抗原中的TCR与MHC-多肽复合物结合，借助生物素-链霉亲和素系统，将MHC-多肽复合物形成四聚体分子，单个MHC-多肽四聚体分子与T细胞表面的多个TCR结合，以提高了MHC-多肽复合物与TCR的亲和力和稳定性；再加入生物素标记的检测抗体标记有PE荧光染料；最后通过流式细胞仪对特异T细胞进行计数以对结核病进行辅助诊断。

本发明可用于结核分枝杆菌感染后特异性T细胞免疫的体外检测，适用于结核疑似病例的临床辅助诊断和潜伏感染筛查。

上述的具体实施方式只是示例性的，是为了更好的使本领域技术人员能够理解本专利，不能理解为是对本专利包括范围的限制；只要是根据本专利公开的技术方案所做出的技术内容实质相同或等同的任何的变更或修饰，均落入本专利包括的范围。