[发明专利]一种坎高罗新B的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，公开了一种坎高罗新B的制备方法。

背景技术

坎高罗新B（Cangorosin B），为三萜类化合物，分子式为C₅₈H₇₄O₈，分子量为899.22，分子结构为：

坎高罗新B来源于卫矛科(Celastraceae) 冬青叶美登木Maytenus ilicifolia Mart.。现代研究表明，坎高罗新B具有细胞毒活性，对P388细胞呈细胞毒作用。

现有技术中，国内尚没有坎高罗新B工业化生产工艺的披露。

发明内容

本发明的目的是提供一种坎高罗新B的制备方法，具体来说，是采用大孔树脂和液相结合的方法制备竹节香附素。

本发明所述的一种坎高罗新B的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

（1）提取：将冬青叶美登木粉碎，加入10-16倍（V/W）药材重量的甲醇溶液，置于超声提取设备中超声提取2-3次，过滤，得到提取液；

（2）萃取：提取液减压浓缩回收甲醇，用乙酸乙酯萃取，弃去乙酸乙酯萃取液，得到水层；

（3）柱层析：将水层上大孔树脂柱吸附，甲醇-水洗脱，分步收集，合并坎高罗新B流分，低温浓缩至有沉淀析出，得到浓缩液；

（4）纯化：浓缩液静置过夜，滤出沉淀，将沉淀物溶于流动相中，超声溶解，用半制备型液相色谱仪纯化，收集目标流分，低温浓缩，干燥得到坎高罗新B。

步骤（1）中所述甲醇溶液浓度为75-90%。

步骤（1）中所述超声提取功率为55-70KHz，提取2次，每次0.5-1h。

步骤（3）中所述大孔树脂为HPD300、HPD450、NKA-9型大孔树脂，甲醇-水体积比为12:5。

步骤（3）和步骤（4）中所述低温为5-10℃。

步骤（4）中所述半制备型高效液相色谱仪填料为：ODS C18，5μm，250*46mm。

步骤（4）中所述流动相为乙腈-水（80:20），流速10.0ml/min，检测波长为254nm。

本发明的积极效果为：本发明制备的坎高罗新B纯度高、具有较强的抗癌活性，应用前景广阔。

分析型高效液相色谱条件：ODS C18，5μm，250*4.5mm(I.D.)，流动相为甲醇：水（75:25），流速1.0ml/min，柱温：室温；检测波长：UV254nm；进样量：10微升。    

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

将冬青叶美登木粉碎，取3kg，加入10倍（V/W）药材重量的90%甲醇溶液，置于超声提取设备中超声提取，提取功率为55KHz，提取2次，每次0.5h，过滤，得到提取液，减压浓缩回收甲醇，用乙酸乙酯萃取，弃去乙酸乙酯萃取液，得到水层，上NKA-9型大孔树脂柱吸附，甲醇-水12:5洗脱，分步收集，合并坎高罗新B流分，在5℃温度下低温浓缩至有沉淀析出，得到浓缩液，静置过夜，滤出沉淀；以乙腈-水（80:20）为流动相，色谱条件：ODS C18，5μm，250*46mm(I.D.)，流动相流速10.0ml/min，柱温：室温，检测波长：UV254nm，进样量：18ml，用半制备型液相色谱仪纯化，将沉淀物溶于流动相中，超声溶解，进样，收集目标流分，在10℃温度下低温浓缩，干燥得到坎高罗新B，含量95.2%。

实施例2：

将冬青叶美登木粉碎，取3kg，加入10倍（V/W）药材重量的75%甲醇溶液，置于超声提取设备中超声提取，提取功率为60KHz，提取2次，每次1h，过滤，得到提取液，减压浓缩回收甲醇，用乙酸乙酯萃取，弃去乙酸乙酯萃取液，得到水层，上HPD450型大孔树脂柱吸附，甲醇-水12:5洗脱，分步收集，合并坎高罗新B流分，在10℃温度下低温浓缩至有沉淀析出，得到浓缩液，静置过夜，滤出沉淀；以乙腈-水（80:20）为流动相，色谱条件：ODS C18，5μm，250*46mm(I.D.)，流动相流速10.0ml/min，柱温：室温，检测波长：UV254nm，进样量：20ml，用半制备型液相色谱仪纯化，将沉淀物溶于流动相中，超声溶解，进样，收集目标流分，在10℃温度下低温浓缩，干燥得到坎高罗新B，含量96.3%。

实施例3：