[发明专利]人血清白蛋白-钌无机药物复合物的制备及其应用

说明书

技术领域

    本发明涉及抗肿瘤药物，具体是人血清白蛋白-KP1019钌无机药物复合物的制备及其应用。 

背景技术

近年来，钌配合物作为新型抗癌药物被人们广泛的研究。钌配合物由于具有独特的物理和化学性质，国际上普遍认为钌配合物属于低毒性，容易吸收并在体内很快排泄。目前已有上百种钌配合物被合成出来，且KP1019已完成I期临床试验，正在进入II期临床阶段研究。然而，我们不得不面临一个现实：抗肿瘤无机药物仍然是一把双刃剑，在治疗疾病的同时，不可避免地产生许多副作用，KP1019虽然已完成临床一期，但仍具有很大毒副作用。显而易见，如何提高抗肿瘤药物的智能性是人们真正急需攻克的难题。与正常组织相比，肿瘤组织的血管丰富、结构特殊，一个重要的表现就是血管内皮间隙较大，这是病变情况下大分子可透过肿瘤组织血管壁的原因。白蛋白符合大分子物质在肿瘤组织的透过性增强及滞留( enhancedpermeability and retention，EPR) 效应，所以白蛋白作为药物载体已经在临床上测试扮有日益重要的角色。 

发明内容

本发明的目的是提供人血清白蛋白与KP1019钌无机药物复合物的制备方法以及该复合物在提高肿瘤药物的药效和靶向性方面的应用。 

实现本发明目的的技术方案是： 

人血清白蛋白-KP1019钌无机药物复合物，它是将人血清白蛋白作为KP1019钌无机药物的靶向生物载体，其制备包括如下步骤：

（1）将KP1019与人血清白蛋白孵育；

（2）浓缩；

（3）用二次去离子水洗涤反复洗涤，制得人血清白蛋白-KP1019钌无机药物复合物。

本发明KP1019钌无机药物的结构式为： 

所述的孵育方法如下：称取KP1019钌无机药物，用DMSO配置成溶液，将药物的DMSO溶液与HSA的水溶液两者按物质的量为1:1混合，DMSO的含量不超过5%，在4℃静置，使两者反应24小时。

本发明人血清白蛋白-KP1019钌无机药物复合物呈心型结构，六个脂肪酸分子和两个钌无机药物分子不对称的贯穿其中。在人血清白蛋白的IB亚域，KP1019钌无机药物完全暴露在水环境中，与组氨酸-146配位结合。在IIA 亚域，三种钌无机药物结合在大疏水腔中。KP1019的钌离子（III）与赖氨酸-199和组氨酸-242形成配位键。 

本发明人血清白蛋白-KP1019钌无机药物复合物的应用，是将人血清白蛋白-KP1019钌无机药物复合物制成注射剂、片剂、丸剂、胶囊、悬浮剂或乳剂，用于治疗乳腺癌、胃癌、肺癌、结肠癌、肝癌等疾病，其剂量为：60-100μM/L 

通过体外细胞实验，证明本发明的人血清白蛋白-KP1019钌无机药物复合物对肿瘤细胞具有抑制作用，且抑制率相比钌无机药物有明显的提高，且对正常细胞的抑制率明显下降。人血清白蛋白-KP1019钌无机药物复合物对肿瘤细胞的凋亡和周期比钌无机药物有明显的促进作用。

本发明的优点是：本发明将人血清白蛋白作为KP1019钌无机药物的靶向生物载体，制成人血清白蛋白-KP1019钌无机药物复合物，使该复合物具有高的血管通透性和截留率，药物选择性聚集在肿瘤细胞中，对正常细胞没有任何影响，明显提高了钌无机药物的靶向性，大大降低了毒性。 

附图说明

图1为人血清白蛋白-KP1019钌无机药物复合物的电子云密度图； 

图2为人血清白蛋白-KP1019钌无机药物复合物的整体结构图；

图3为钌无机药物在白蛋白与的结合位点和结合腔室. A和D：IB亚域；B和C：IIA亚域；

图4为 AO/EB双染的细胞形态图： (A)对照组（细胞未加药物） (B) 细胞中加入80μM的KP1019 (C) 细胞中加入80μM的白蛋白-KP1019复合物 ；

图5:Annexin V/propidium iodide双染法定量检测药物处理24小时候的细胞凋亡  (A)对照组（细胞未加药物）(B) 细胞中加入80μM的KP1019 (C) 细胞中加入80μM的白蛋白-KP1019 ；

图6: 流式细胞仪定量检测药物处理48小时候的细胞周期变化(A)对照组（细胞未加药物）(B) 细胞中加入80μM的KP1019 (C) 细胞中加入80μM的白蛋白-KP1019 。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步说明。