[发明专利]一种地高辛单抗检测内源性洋地黄样因子含量的试剂盒及使用方法

说明书

技术领域

本发明属于属于医疗器械技术领域，尤其是一种地高辛单克隆抗体检测内源性洋地黄样因子含量的试剂盒及使用方法。

背景技术

孕期先兆子痫（孕期早痫）是一种病发原因复杂的综合征，如果不及时治疗，可发展为子痫，危及生命。主要症状有高血压、蛋白尿，水肿，惊厥，肾功能损伤等，已成为世界上孕妇致死率最高的一种疾病，目前具体病因不明。有研究证明，胎盘产生的一种导致易感妇女母体血管内皮功能障碍的物质可能是早痫病发的其中一个原因。血压升高是该疾病最明显的标志，同时造成对产妇内皮，肾脏和肝脏的损害。

先兆子痫（早痫）在全球孕妇中发病率为6-8%，通常发病于妊娠二期晚期或妊娠三期，大部分在孕期32周之后发病（32周前发病被认为是早期发病），极少数孕妇会在孕期20周发病。初次怀孕的孕妇发病率最高，并且随着妊娠次数的增加，该疾病发病率大幅度降低。早痫多发于具有高血压史，糖尿病史，肥胖症史，自身免疫性疾病史如狼疮，和多胎妊娠（双胞胎或多胞胎）的孕妇中，其发病过程因人而异，大多数病例可以在分娩前被确诊。少数病例在分娩后六周才被确诊，称为“产后早痫”，确诊后除了剖腹产或引产手术，没有其他治疗方式。早痫是最常见的的妊娠综合症，同时影响母亲和胎儿，导致早产儿甚至对母婴造成生命危险。

传统上早痫的确诊标志是孕期高血压（两个独立的至少相隔六小时的测量值，收缩压为140以上和/或舒张压为90以上）和24小时尿液样本中的蛋白含量高于300毫克（蛋白尿）。比基线血压（BP）高30毫米汞柱的收缩压或高15毫米汞柱的舒张压，不能达到140/90的绝对标准，仍然被认为是重要发病信号，但并不能就此确诊。肿胀或水肿（尤其是在手和脸）最初曾被认为是诊断早痫的一个重要标志，但目前的医学实践证明，只有高血压和蛋白尿可以作为诊断标准。

虽然早痫是一种致命性疾病，但其早期发病通常无症状，且一般情况下，早痫的信号都不是特异性的，比如孕期惊厥，在怀孕过程中，其他原因比子痫更容易导致惊厥，因此早痫的早期诊断一直是医学界无法攻克的一个难题。

在早痫病人的症状中，一种钠钾泵抑制因子-内源性洋地黄样因子（endogenous digitalis-like factor，EDLF）水平的升高，是早痫的重要标志。这种因子能够导致血压升高，存在于人体和动物组织及体液中，其化学结构和生物活性与植物洋地黄中提取的类固醇强心剂相似，故名“洋地黄样因子”，此因子能够以与地高辛等强心剂类似的机制结合到钠钾泵上，并抑制其活性，但目前为止，此类因子的具体化学结构仍然未知。许多高血压病症均发现伴随内源性洋地黄样因子水平的升高，因此，该因子很可能是造成高血压的原因。

目前，地高辛多克隆抗体Digibind在美国已被FDA批准用于二期临床实验治疗重症早痫，并取得良好疗效。

为了实现对妊娠早痫的早期诊断，达到早期治疗的目的，需要发明一种可以特异性精确测量样品中内源性洋地黄样因子的方法，并制成操作简便快捷的试剂盒。这种需要长期使用的免疫学分析试剂盒，要求抗体为可“无限量”供应、高特异性、高均一性的单克隆抗体。Digibind是多克隆抗体，并且价格昂贵。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简单方便、灵敏度高、特异性强、稳定可靠的利用地高辛单抗检测内源性洋地黄样因子含量的试剂盒及使用方法，本试剂盒的检测可以达到nM即纳摩尔/升，为后续治疗提供有利依托。

本发明实现目的的技术方案如下：

一种地高辛单抗检测内源性洋地黄样因子含量的试剂盒，包括如下组份

一抗地高辛单抗、二抗兔抗鼠IgG、³H标记乌本苷、聚乙二醇4000、pH=7.4的磷酸缓冲液、³H闪烁液、pH=7.4的Tris缓冲液。

而且，还包括乌本苷。

而且，所述一抗地高辛单抗10纳克/毫升、二抗兔抗鼠IgG2.3×10^-8摩尔/升，所述³H标记乌本苷浓度为10.0Ci/mmol，所述聚乙二醇4000浓度为30wt%。

而且，所述试剂盒用于检测人体血清、胎盘组织分泌液、以及冷冻胎盘组织中的内源性洋地黄样因子的含量。

一种地高辛单抗检测内源性洋地黄样因子含量的试剂盒的使用方法，步骤如下

(1)采集胎盘，切成组织块，液氮冷冻，保存于-80℃；

(2)将冷冻胎盘组织块切成薄片，置于匀浆器中，放入液氮罐中冷冻1分钟；以1500rpm的速度将组织薄片匀浆5分钟；