[发明专利]一种制备内源性洋地黄因子的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种内源性洋地黄因子的制备方法。 

背景技术

内源性洋地黄样因子（endogenous digitalis-like factor，EDLF）亦称内洋地黄素或内地高辛素,是体内产生和分泌的一种具有洋地黄活性的生物活性物质，该物质具有很好的药理作用： 

（1）具有强心作用，研究表明EDLF能增强豚鼠心肌收缩力，这种作用不受A或B肾上腺素受体阻断剂的影响。充血性心力衰竭病人血浆中EDLF水平明显升高，且和左心房和肺动脉压存在相关性。孕妇和胎儿体内总EDLF和游离EDLF含量都是偏高的，而双胎妊娠又明显高于单胎妊娠，这可能是通过EDLF的强心作用增加心脏输出量来满足心脏负荷增加的需要。 

（2）具有利钠、利尿作用，Veress等将血浆中的几种不同的成分分别给大鼠注射，发现其中一种小分子量的非肽类片段作用最强，可使尿钠明显增加。此作用在注射后一小时开始，150分钟达到最大值，尿钠增加近20倍，最后证明这种小分子的非肽类片段是EDLF。EDLF的利钠、利尿作用可能不是通过抑制醛固酮或影响肾小球滤过率而实现的，因为醛因酮变化的程度和时相与血容量扩张时利钠，利尿作用的变化不符。这种利钠、利尿作用不受肾上腺及肾神经功能的影响。给予血管紧张素转换酶抑制剂(captopril)也不影响这一作用。而且在利钠、利尿过程中,全身及肾局部血流量、肾小球滤过率均无变化。许多学者证明，EDLF的利钠、利尿作用机制主要是抑制肾小管对钠离子的重吸收引起的。 

（3）收缩血管作用，近年来EDLF对血管的作用已经受到人们的关注。EDLF 作为一种利钠因子和缩血管物质,在高血压发生过程中可能起着重要作用。高血压患者血浆抑制Na⁺、K⁺—ATP酶活性的能力与平均动脉压呈正相关。另外，EDLF可增加血管平滑肌对去甲肾上腺素、血管紧张素Ⅱ的敏感性。Takahashi观察盐负荷大鼠EDLF含量明显增加，从盐负荷狗血浆中提取的EDLF可使大鼠提睾肌小动脉对去甲肾上腺素的反应性增强10%，给正常大鼠注射该物质50分钟后，平均血压上升10mmHg。 

（4）与其它血管活性物质，EDLF与内皮素、EDLF与心钠素、EDLF与5-羟色胺都有着密切的关系。 

综上所述，研究内源性洋地黄因子的制备方法，具有重要意义。 

发明内容

基于上述原因，申请人通过多年的研究，确定了一种操作简单方便，特异性强的提取纯化胎盘组织内源性洋地黄样因子的方法。本发明将超滤技术及抗体技术有机的结合，可以专一地将内源性洋地黄样因子从组织中分离出来，解决了长久以来由于其在体内含量过低，并且相似分子量杂质过多，而造成的分离困难的难题。 

本发明所述的内源性洋地黄样因子，可以用于先兆子痫或子痫的病理研究等。也可以用于其它药理作用。 

本发明通过下述技术方案实现的。 

一种制备内源性洋地黄因子的方法： 

（1）取胎盘，切成块状，用液氮冷冻，保存于-80℃； 

（2）冷冻胎盘切片后放入匀浆器中，将匀浆器放入液氮罐中50-70秒后，取出匀浆器，在1400转/分钟-1600转/分钟下，匀浆4-6分钟； 

（3）取出匀浆组织，加入等体积的有机溶剂，混合均匀，在1400转/分钟 -1600转/分钟下离心4-6分钟，静置； 

（4）取上清液，回收有机溶剂至尽，用超滤膜离心超滤，在2800转/分钟-3200转/分钟下离心8-12分钟，保留透过液； 

（5）透过液中加入地高辛抗体，混合均匀，室温下放置25-35分钟，用超滤膜离心超滤，在800转/分钟-1200转/分钟下离心超滤8-12分钟，保留未透过物质，透过液弃去； 

（6）未透过物质加入甘氨酸溶液，混合均匀，用超滤膜离心超滤，在800转/分钟-1200转/分钟下离心8-12分钟，透过液浓缩，得到内源性洋地黄因子。