[发明专利]一种综合利用软骨清洁化提取硫酸软骨素的方法

权利要求书

1.一种综合利用软骨清洁化提取硫酸软骨素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）软骨水解预处理：将动物软骨粉碎，放入真空罐中，加入蒸馏水，控制罐中真空度0.02-0.04MPa，温度70-80℃，加热2-3h；

（2）酶解：将预处理溶液打到酶解罐中调节pH至7-8，加入软骨质量0.8-1.2%的胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶，酶解；

（3）离心分离得到骨油和骨粉：酶解结束后利用碟片式三相离心机以速度为6500r/min，离心时间为15-20min，分别得到骨油、滤液和骨渣，骨渣粉碎后得到骨粉；

（4）浓缩：将离心后的滤液通过三效浓缩器浓缩，浓缩过程中，控制一效温度在90-95℃，二效在85-90℃，三效在75-80℃，浓缩到体积是原来滤液的55-65%时，停止浓缩；

（5）吸附洗脱：将浓缩液经树脂吸附，温度控制在65-75℃，pH =7-8，至层析液完全进入树脂后，用洗脱液淋洗柱壁2次，再分别用pH=4.0、pH=5.0、pH=6.0的乙酸-乙酸钠缓冲液洗脱，流速50mL/h，收集流出液；

（6）硫酸软骨素制备：将乙醇加入上述离子交换层析液中至乙醇含量达80%，硫酸软骨素析出，过滤，乙醇洗涤3-5次，烘干，得硫酸软骨素纯品；

（7）蛋白肽制备：将吸附后所有未结合的水解蛋白质溶液打入浓缩罐浓缩，当固形物在45-55%左右时，停止浓缩，将浓缩液打入喷雾干燥塔进行干燥得到蛋白肽。

2.根据权利要求1所述的一种综合利用软骨清洁化提取硫酸软骨素的方法，其特征在于，所述步骤（1）中将动物软骨粉碎到1-2cm以下碎块。

3.根据权利要求1所述的一种综合利用软骨清洁化提取硫酸软骨素的方法，其特征在于，所述步骤（1）中加蒸馏水的量为软骨质量的80-95%。

4.根据权利要求1所述的一种综合利用软骨清洁化提取硫酸软骨素的方法，其特征在于，所述步骤（2）中加入胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶的添加比例为1：1：1或1：2：1或1：1：2。

5.根据权利要求1所述的一种综合利用软骨清洁化提取硫酸软骨素的方法，其特征在于：所述步骤（2）加入胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶的添加比例优选为1：2：1。

6.根据权利要求1所述的一种综合利用软骨清洁化提取硫酸软骨素的方法，其特征在于，所述步骤（2）中酶解过程中应不断调节溶液pH保持在7.5-8.0，保持温度35-40℃，酶解4-6h。

7.根据权利要求1所述的一种综合利用软骨清洁化提取硫酸软骨素的方法，其特征在于：所述步骤（5）中树脂吸附过程中采用的树脂为D001-cc树脂，装于3支3×20cm层析柱中，分别用pH=6.0、pH=5.0、pH=4.0的乙酸-乙酸钠缓冲液平衡树脂，至流出液与洗脱液pH值相同，平衡完成。

8.根据权利要求1所述的一种综合利用软骨清洁化提取硫酸软骨素的方法，其特征在于，所述步骤（7）中分子量在5KD以下的蛋白肽占85%以上。