[发明专利]哺乳动物骨髓细胞内液的制备方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及临床医学技术领域，特别涉及一种哺乳动物骨髓细胞内液的制备方法及其用途。

背景技术

当细胞发生基因突变后，细胞会出现异常增殖且不受机体免疫系统控制，最终导致细胞的恶变，形成恶性肿瘤。恶性肿瘤能侵犯、破坏邻近的组织和器官，癌细胞能够快速繁殖和扩散，它是目前威胁人类生命健康的最主要疾病之一，是医学界急待攻克的最重要的研究课题，随着医疗技术和生活水平的提高，人们对生存质量越来越重视，肿瘤临床治疗急待有一种针对性强、安全，毒副作用小的治疗方法。肿瘤的治疗有药物治疗、手术治疗和放射治疗，药物治疗又包括了化学药物化疗、生物治疗以及基因治疗，目前有很多药物可以杀死肿瘤细胞，但都缺乏特异性，毒性大，且不能治愈肿瘤。随着医学理论及临床实践的不断进展，特别是肿瘤分子生物学的飞速发展，恶性肿瘤的药物治疗已不再拘泥于普通的化学治疗药物。目前许多研究人员转向对细胞生物治疗的研究，有研究报告蛋白酪氨酸激酶功能的失调会引发生物体内的一系列疾病，超过50%的原癌基因和癌基因产物都具有蛋白酪氨酸激酶活性，它们的异常表达将导致细胞增殖调节发生紊乱，进而导致肿瘤发生。也有人认为糖蛋白的减少会导致细胞信号传达障碍，也可以导致肿瘤发生，因此有很多利用海洋动物多糖蛋白抑制肿瘤生长的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种哺乳动物骨髓细胞内液的制备方法及其用途，本发明所制备的哺乳动物骨髓细胞内液具有抑制恶性肿瘤的效果。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

哺乳动物骨髓细胞内液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将新鲜离体骨髓细胞加入生理盐水，浓度为10⁸～10⁹细胞/ml；然后反复冻融将骨髓细胞裂解；然后经高速离心使细胞膜和细胞内液分离，然后提取上清液，过滤至无菌，所得滤液即为哺乳动物骨髓细胞内液；所述新鲜离体骨髓细胞来自哺乳动物。

本发明进一步的改进在于：所述新鲜离体骨髓细胞来自新鲜离体下肢骨；所述新鲜离体下肢骨经酒精消毒后，将骨髓腔打开，获取所述新鲜离体骨髓细胞；所述新鲜离体下肢骨来自3-6个月大的哺乳动物。

本发明进一步的改进在于：反复冻融的次数为4-6次。

本发明进一步的改进在于：所述高速离心为10000-14000cpm离心20-40分钟。

本发明进一步的改进在于：过滤至无菌具体为将上清液经2um滤网过滤达到无菌。

本发明进一步的改进在于：所述哺乳动物为狗、猪、羊或者兔。

哺乳动物骨髓细胞内液在制备用于抑制和/治疗肿瘤的药物中的应用。

本发明进一步的改进在于：所述肿瘤为黑色素细胞瘤或肝癌。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

目前肿瘤的治疗有药物治疗、手术治疗和放射治疗，药物治疗又包括了化学药物治疗、生物治疗以及基因治疗，但都不能达到满意的治疗效果，特别应该提到的化疗是主要治疗方法，但对人体的杀伤作用特别大，往往肿瘤没被抑制住，人已经没了。而本发明制备的哺乳动物骨髓细胞内液对机体无毒副作用，且有明显的肿瘤抑制作用。

附图说明

图1为体外培养对比图；

图2为体内试验对比图。

图3为哺乳动物骨髓细胞内液抑制肿瘤细胞生长的对比图。

图4为注入哺乳动物骨髓细胞内液对小鼠生存率的影响对比图。

具体实施方式

本发明一种哺乳动物骨髓细胞内液（以下称为：life-1）的制备方法，包括以下步骤：

将新鲜离体下肢骨经酒精消毒后，将骨髓腔打开，取出骨髓细胞，加入生理盐水10⁸～10⁹细胞/ml；然后反复冻融4-6次将骨髓细胞裂解；然后经10000-14000cpm高速离心20-40分钟后使细胞膜和细胞内液分离，提取表面上清液（即细胞内液）；上清液经2um滤网过滤达到无菌，所得滤液即为哺乳动物骨髓细胞内液（life-1）。新鲜离体下肢骨来自3-6个月大的哺乳动物。本发明所制备的哺乳动物骨髓细胞内液对肿瘤抑制非常明显，并且无毒副作用，可以被临床用来治疗肿瘤。

实施例1