[发明专利]脱脂南极磷虾皂甙的提取及薄层层析扫描检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及脱脂南极磷虾皂甙的提取及薄层层析扫描检测方法。

背景技术

南极磷虾（Euphausia superba），是一种生活在南极洲水域的磷虾，以群集方式生活，有时密度可达每立方米10,000～30,000只。它们以微小的浮游植物作为食物，身长大约6厘米，重约2克，有6年的寿命。它们是南极生态系统的关键物种，若以生物质能来说，它们可能是地球上最成功的生物物种（大约有5亿吨）。因南极磷虾蕴藏量巨大，加上群体的生活容易捕捞，所以吸引很多国家对它进行开发。目前，南极磷虾最主要用途是作为鱼饲料。而在挪威、加拿大等国则把南极磷虾虾油提取出来作为保健品，价格约2000元人民币/kg。由于南极磷虾含有大量氟（约2400mg/kg）,不能直接食用。因而，以南极磷虾为原料，开发天然药物，对其综合利用，具有广阔的应用前景。

我们对南极磷虾的开发利用进行了数年研究。发现在蒸除南极磷虾虾油中溶剂的过程中总是有大量泡沫产生。南极磷虾的水提液和醇提液在加热搅拌时，泡沫更多；停止加热搅拌，泡沫依然持久不消。该现象说明南极磷虾中含有皂甙。目前，还没有对南极磷虾皂甙提取的研究，本发明对南极磷虾皂甙进行了提取，并对其进行了检测定量。

发明内容

本发明提供了一种操作简单、快速、准确、可靠的脱脂南极磷虾皂甙提取和检测方法。

本发明的技术方案是：

脱脂南极磷虾皂甙的提取及薄层层析扫描检测方法，具体步骤是：

1）将疏水性溶剂除去油脂的干南极磷虾利用甲醇进行加热提取，蒸发除去甲醇，得到膏状物。

2）往步骤1）所得膏状物加入乙醚，搅拌溶解，过滤得滤液，蒸发去除乙醚得皂甙粗提取物。

3）将步骤2）所得的皂甙粗提物溶于甲醇制成样品液，用甲醇溶解齐墩果酸制成不同浓度的标准液。

4)将步骤3）所得的样品液和不同浓度的标准液分别点于同一块高效薄层硅胶板GF₂₅₄上，展开剂加入展开缸中进行预平衡，后将高效薄层硅胶板放入展开缸中进行展开，展距达到8cm，取出晾干。

5）将浓度为10%的硫酸乙醇溶液加到高效薄层硅胶板上进行烘烤染色，再用浓度10%液体石蜡氯仿溶液进行二次染色。

6）利用薄层扫描仪进行薄层层析扫描，得到皂甙R_f（比移值）和峰面积积分值；由薄层色谱仪管理软件计算出标准液质量和峰面积积分值关系，根据样品液的峰面积积分值计算出样品液皂甙的质量。

步骤1）中，所述疏水性溶剂是正己烷,、植物油抽提溶剂或石油醚。

步骤1）中，所述甲醇与南极磷虾体积质量比例为6：1，甲醇提取3次，反应温度为80℃。

步骤2）中，所述所得膏状物与乙醚的质量体积比例为1：6～10。

步骤2）中，所述的标准液为5种不同浓度，为0.6,2.4,3.0,3.6,4.2μg/μL。

步骤4）中，所述展开剂为二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸，体积比例为9～11：2～5:0.3～0.5。

步骤4）中，所述的展开剂预平衡和硅胶板展开过程的温度为10℃。

步骤5）中，所述的染色过程的烘烤温度为110℃。

本发明在进行薄层层析时，为取得有效效果，对展开剂进行了探索，并利用不同的试剂组合：氯仿-甲醇-水；正丁醇-水-冰乙酸；正丁醇-甲苯-冰乙酸；正丁醇-正己烷-冰乙酸；正丁醇-二甲苯-冰乙酸；正己醇-二甲苯-冰乙酸；正辛醇-二甲苯-冰乙酸和二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸。每一种组合，都进行了多次的比例调试，最后，以配比为二甲苯-乙酸丁酯-冰乙酸=9～11：2～5:0.3～0.5的展开剂和展开温度10℃时展开效果最佳。

目前动物种类中主要在棘皮动物中发现有皂甙，甲壳动物中至今未发现有皂甙，利用本发明的方法首次在南极磷虾中提取了皂甙，并对提取的皂甙进行薄层检测。检测方法简单、快速、准确、可靠、稳定。

具体实施方式

根据实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

脱脂干南极磷虾100g，加入甲醇600mL，在80摄氏度水浴中加热搅拌提取3次，每次提取30分钟之后过滤。合并提取液，旋转蒸发除去甲醇得膏状物60g。向膏状物中加入乙醚360mL，搅拌溶解，滤除沉渣得滤液。蒸除滤液中的乙醚，得皂甙粗提取物15g。

将含皂甙的粗提物溶于甲醇制成浓度为30μg/μL的样品液。齐墩果酸配制成五种不同浓度的标准液：0.6,2.4,3.0,3.6,4.2μg/μL。