[发明专利]一种高纯度金腰素的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种高纯度金腰素的制备方法。

背景技术

母菊是菊科植物，味辛，微苦，性凉，常用于感冒发热、咽喉肿痛、肺热咳喘、势痹肿痛、疮肿等 。现代研究发现母菊中含有大量挥发油、黄酮类和内酯类物质，具有消炎、解痉、抑菌作用。金腰素为母菊中黄酮类物质，分子式C19H18O8 ，分子量375.35，具有抗菌、抗病毒作用，尤其具有低细胞毒性，而具有很强的抗EV71活性。

通过文献检索，现有高纯度金腰素的制备方法，多采用硅胶柱分离，方法专属性差，方法操作复杂，收率低，不适合工业化。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术不足和缺陷，提供一种操作简便的高纯度金腰素的制备方法。

本发明的目的是这样来实现的：一种高纯度金腰素的制备方法，其特征在于以下步骤：

    1）取母菊粉碎，加入适量水和生物酶，30-40℃酶解10-40h，再加入5-10倍量50-90%乙醇溶液回流提取，提取液浓缩至无醇，加入大孔树脂柱吸附，乙醇溶液梯度洗脱，洗脱液浓缩调节ph1-3放置结晶，结晶物滤出；

    2）上述结晶物用乙醇溶液解加入聚酰胺树脂干燥，装柱，乙醇溶液梯度洗脱，洗脱液浓缩结晶，结晶物再用99%乙醇溶液重结晶即得。

    步骤1）中所述生物酶可选纤维素酶、淀粉酶和果胶酶的中的一种，用量为原料量的1-5‰。

    步骤1）中所述的大孔树脂型号可选HZ816、ADS-21、AB-8和HPD400中的一种。

步骤1）、2）中所述的乙醇溶液梯度洗脱为：先用3-5倍柱体积20-50%乙醇溶液洗脱，再用5-10倍量60-90%乙醇溶液洗脱。

采用本发明制备金腰素，水解过程温和，产品收率高，方法操作简单，污染小，能耗低，易于工业化生产。

具体实施方式：

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

实施例1：

取10kg母菊粉碎，加入等体积ph4的盐酸水溶液和30g纤维素酶，在温度40℃条件下酶解20h，然后加入10倍量70%乙醇溶液回流提取2次，提取液减压浓缩，浓缩液加入HZ816大孔树脂吸附，先用5倍柱体积30%乙醇溶液洗脱，再7倍量70%乙醇溶液洗脱，洗脱液浓缩调节ph2放置结晶，结晶物滤出用90%乙醇回流溶解，加入100g聚酰胺树脂，干燥，装柱，先用4倍柱体积40%乙醇溶液洗脱，再6倍量75%乙醇溶液洗脱，洗脱液浓缩结晶，结晶物再用99%乙醇溶液回流溶解结晶，结晶物干燥，得金腰素3.2g，经HPLC检测，含量98.3%。

实施例2：

取10kg母菊粉碎，加入等体积p4.5的硫酸水溶液和40g淀粉酶，在温度50℃条件下酶解18h，然后加入6倍量80%乙醇溶液回流提取3次，提取液减压浓缩，浓缩液加入ADS-21大孔树脂吸附，先用5倍柱体积40%乙醇溶液洗脱，再10倍量75%乙醇溶液洗脱，洗脱液浓缩调节ph3放置结晶，结晶物滤出用95%乙醇回流溶解，加入150g聚酰胺树脂，干燥，装柱，先用5倍柱体积35%乙醇溶液洗脱，再7倍量70%乙醇溶液洗脱，洗脱液浓缩结晶，结晶物再用99%乙醇溶液回流溶解结晶，结晶物干燥，得金腰素3.6g，经HPLC检测，含量98.5%。

实施例3：

取10kg母菊粉碎，加入等体积ph5的盐酸水溶液和50g果胶酶，在温度45℃条件下酶解25h，然后加入10倍量50%乙醇溶液回流提取2次，提取液减压浓缩，浓缩液加入AB-8大孔树脂吸附，先用5倍柱体积20%乙醇溶液洗脱，再7倍量60%乙醇溶液洗脱，洗脱液浓缩调节ph1放置结晶，结晶物滤出用95%乙醇回流溶解，加入130g聚酰胺树脂，干燥，装柱，先用5倍柱体积20%乙醇溶液洗脱，再8倍量60%乙醇溶液洗脱，洗脱液浓缩结晶，结晶物再用99%乙醇溶液回流溶解结晶，结晶物干燥，得金腰素3.6g，经HPLC检测，含量96.9%。

实施例4：

取10kg母菊粉碎，加入等体积ph3的盐酸水溶液和40g纤维素酶，在温度45℃条件下酶解15h，然后加入8倍量90%乙醇溶液回流提取2次，提取液减压浓缩，浓缩液加入HPD400大孔树脂吸附，先用4倍柱体积40%乙醇溶液洗脱，再5倍量90%乙醇溶液洗脱，洗脱液浓缩调节ph3放置结晶，结晶物滤出用95%乙醇回流溶解，加入150g聚酰胺树脂，干燥，装柱，先用3倍柱体积50%乙醇溶液洗脱，再5倍量90%乙醇溶液洗脱，洗脱液浓缩结晶，结晶物再用99%乙醇溶液回流溶解结晶，结晶物干燥，得金腰素3.5g，经HPLC检测，含量97.4%。