[发明专利]利用甘油生产琥珀酸的大肠埃希氏菌及构建方法和用途有效
| 申请号： | 201310358766.2 | 申请日： | 2013-08-15 |
| 公开（公告）号： | CN103436477A | 公开（公告）日： | 2013-12-11 |
| 发明（设计）人： | 陈涛;李宁;王智文;赵学明 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P7/46;C12R1/19 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300072*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 甘油 生产 琥珀酸 大肠 埃希氏菌 构建 方法 用途 | ||
【权利要求书】：
1.一种利用甘油生产琥珀酸的大肠埃希氏菌（Escherichia coli），其保藏编号为CGMCC NO.7999。
2.权利要求1的一种利用甘油生产琥珀酸的大肠埃希氏菌的构建方法，其特征包括如下步骤：（1）敲除大肠杆菌磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因，并过量表达乙醛酸循环的关键酶异柠檬酸裂解酶和苹果酸合成酶，得到进化的出发菌株；
（2）将步骤（1）获得的菌株通过在以甘油为唯一碳源的M9基本盐培养基中连续转接培养的方式进行进化，得到能够在以甘油为唯一碳源的M9基本盐培养基中生长的并且乙醛酸循环的通量得到增强的进化菌株；
（3）将步骤（2）获得的菌株通过敲除琥珀酸脱氢酶基因、过量表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶和α-酮戊二酸脱氢酶系，得到利用甘油生产琥珀酸的大肠埃希氏菌（Escherichia coli）。3．权利要求1的一种利用甘油生产琥珀酸的大肠埃希氏菌的用途，其特征是包括如下步骤：在发酵罐中，装入以甘油为唯一碳源的M9基本盐培养基，以6%-8%的体积比将一种利用甘油生产琥珀酸的大肠埃希氏菌接入所述培养基中，在28-40℃，通气速度为0.5-1.5vvm，通过调节搅拌速率控制溶氧在饱和溶氧的30%以上，全程控制pH在6.8-7.3，发酵50-60小时，得到含琥珀酸的发酵液。
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