[发明专利]一种博落回体细胞胚胎发生和植株再生的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种博落回体细胞胚胎发生和植株再生技术的方法。

背景技术

博落回(Macleaya cordata(Willd)R．Br)属于罂粟科(Papaveraceae)博落回属植物，别名号筒杆、山号筒，为多年生直立大型草本，高约1-4米，全体带白粉,根茎粗大，茎绿色,圆柱形中空无毛,主要分布于我国长江流域及其以南各省，《本草拾遗》记载博落回性味温、苦、有毒，其汁液黄色，外涂治“顽癣”、“白癜风”等，博落回在民间用于治疗痈肿疗毒，恶疮溃疡，疥疮等体表疾病，有悠久的应用历史。现代药理研究表明，博落回含有血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱、别隐品碱等多种生物碱（胡之壁等，博落回果实中有效成分的研究，药学学报，1979；王欣.博落回中生物碱成分的研究，西北农林科技大学，2005（5）：229；曾建国等，不同生长期博落回果实中血根碱与白屈菜红碱的含量，中药材，1999,22（5）：229；叶冯芝等，博落回的生物碱成分，中国中药杂志，2009），具有杀虫（毛鹏，博落回生物碱成分及杀螨活性研究(I).陕西杨凌:西北农林科技大学,2004；国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册.北京:人民卫生出版社,1986:39-40；袁涛忠，张华生.博落回灭杀蛆蝇效果的实验观察.中国寄生虫学与寄生虫病杂志,1999,22（2）：88）、抑菌（赵东亮等,博落回生物碱的抑菌作用研究,食品科学,2005,26(1):45-47；郁建平等，博落回生物碱对8种真菌的抑菌作用，山地农业生物学报,2006,25(1):89-91；胡乔木等,核桃楸和博落回粗提物对不同植物病原真菌的抑制作用研究,湖北植保,2006,(2):3l-32；万学攀等,博落回生物碱成分初步分析及其抑菌活性部位筛选,黑龙江畜牧兽医,2007(2):89-91；陈利军等,7种药用植物提取物抑菌活性测定,安徽农业科学,2006,34(21):5562-5571）等药理活性。博落回提取物现已成为一种重要的代替抗生素物质和植物源农药原料，市场上已有博落回注射液、用博落回提取物开发的饲料添加剂等产品，应用前景广阔。

博落回野生资源有限，且随着逐步的开发，储量日趋下降，目前博落回的繁殖方法主要有两种：一种是种子繁殖，一种是分根繁殖。种子繁殖受季节以及环境影响较大，生产周期较长，子代会出现退化现象，不能很好的遗传亲本的优良性状；分根繁殖方法操作复杂，繁殖量小，不适应大规模生产种苗的需求。利用体细胞胚胎发生培养技术，可以快速高效的大规模生产遗传上相对均一的博落回种苗；且体细胞胚胎还可制成“人工种子”，利用体胚发生技术可获得大量的博落回“人工种子”，通过这两种方式可以很好的满足市场对博落回种苗的需求，能极大的促进博落回相关产业的发展。目前，关于博落回体胚发生的组织培养技术，国内外尚无相关的研究报道。

发明内容

本发明的目的是，针对市场对博落回资源的大量需求及当前资源与繁殖方式不能满足市场需求的矛盾，提供一种利用生物技术工厂化生产博落回种苗的方法，其克服了现有繁殖方法所存在的缺陷，便于快速、高效、大规模的生产遗传均一、健康的高质量博落回种苗。

本发明的目的通过以下的技术方案来实现。

一种博落回体细胞胚胎发生和植株再生的方法，包括如下步骤：

1）外植体的取材与消毒：取未开放的博落回花蕾消毒后；将花蕾轻轻拨开，拔取花丝，切除花药，作为外植体，备用；

2）胚性愈伤组织诱导培养：将步骤1）消毒的花丝外植体接种到MS+2,4-D0.5～3.0mg/L+6-BA0.5mg/L培养基上；在温度25±1℃，光照强度1000-3000Lx，光照时间16～18h/d的条件下进行胚性愈伤诱导培养，培养30～40d后得到胚性愈伤组织；

3）体细胞胚胎诱导培养：将步骤2）得到的胚性愈伤组织转接后形成胚状体或芽；

4）体细胞胚胎萌发与成苗培养：将步骤3）得到的胚状体或芽转接形成生根的完整植株；

5）再生苗的移栽与培养：将生根苗移栽到炼苗基质中炼苗后，再进行正常的水肥管理。

步骤1）所述的外植体的取材与消毒过程具体为：取未开放的博落回花蕾，用蒸馏水清洗，在超净工作台上用无菌水冲洗干净；用70%酒精浸泡10s，再用0.1%升汞溶液浸泡8～10min消毒灭菌后用无菌水冲洗3～4次；将花蕾轻轻拨开，拔取花丝，切除花药，作为外植体，备用。