[发明专利]MUC15与p-AKT在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用

说明书

技术领域

本发明属于医学生物检测技术领域，更具体地，本发明涉及MUC15蛋白与p-AKT蛋白的负相关性，及其在制备肝癌预后评估试剂盒中的应用。

背景技术

肝细胞癌是最致命的恶性肿瘤之一，世界范围内，占肿瘤相关死亡的第三位，更是肝硬化病人死亡的首要原因[1，2，3]。2008年，新诊断的肝细胞癌病人超过70万，按年龄分层，每10万人中，就有新诊断的肝细胞癌病人16个[4]。经过仔细筛选的早期肿瘤病人，通过肝切除术，肝移植和射频消融，可以得到有效的治疗[5]。但晚期肿瘤病人，因为术后复发转移，预后依然很差[6]。因此，鉴定新的肝癌进展分子标记，并深刻理解肝癌术后转移复发的分子机制，对于阻止肿瘤复发，延长患者生存依然十分重要。

蛋白激酶B(Protein kinase B，PKB或AKT)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，与磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol3-kinase，PI3K)组成的PI3K/AKT信号通路广泛存在细胞中，在凋亡、衰老、增殖等细胞生命活动中起重要作用[7]。非磷酸化AKT蛋白不具备生物学活性，经磷酸化作用生成磷酸化AKT(Phosphorylated AKT，pAKT)。

粘蛋白属于一类高分子量糖蛋白家族，通常在胞浆或者细胞膜上，会被高度的O型糖基化包被。通常生理条件下，大部分上皮细胞中具有粘蛋白的表达。近年来，很多文献报道粘蛋白在炎症向肿瘤的进展过程中，起到了很重要的作用。粘蛋白MUC15最初是从牛奶脂肪小泡的膜上被分离鉴定的，其基因定位于11号染色体短臂14.3区[8]。MUC15的mRNA在多种人类组织中通过逆转录PCR被检测到。在人类胎盘的发育过程中，MUC15的表达在胚胎晚期比胚胎早期要高。最近有研究揭示，在肿瘤的发生发展及转移过程中，MUC15可能发挥了潜在的作用。例如，在结肠腺癌中，MUC15的表达是异常升高的，并能促进人类结肠癌细胞的恶性表型[9]。但是过表达外源的MUC15，能够抑制滋养层样细胞JAR和JEG-3的侵袭能力[10]。

然而，MUC15在肝癌发生发展及转移复发，以及肝癌术后预后评估中的作用等研究，在国内外上仍是空白。

发明内容

本发明的目的在于提供MUC15与p-AKT联合应用作为肝癌预后评估标志物的用途。

在本发明的第一方面，提供MUC15蛋白和p-AKT蛋白的用途，用于制备进行肝细胞癌预后评估的诊断试剂。

在本发明的另一方面，提供一种用于肝细胞癌预后评估的试剂盒，所述试剂盒中包括：

特异性检测MUC15蛋白表达水平的试剂；和

特异性检测p-AKT蛋白表达水平的试剂。

在一个优选例中，所述的试剂盒中，所述的特异性检测MUC15蛋白表达水平的试剂是抗MUC15蛋白的抗体；和/或所述的特异性检测p-AKT蛋白表达水平的试剂是抗p-AKT蛋白的抗体。

在另一优选例中，所述的抗体是多克隆抗体或单克隆抗体。

在另一优选例中，所述的抗MUC15蛋白的抗体是利用MUC15重组蛋白免疫兔子后制备得到的。

在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括：携带有可检测信号分子的检测抗体。

在另一优选例中，所述的可检测信号分子选自(但不限于)：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酯酶、葡萄糖氧化酶、β–D-半乳糖苷酶、脲酶、过氧化氢酶、或葡萄糖淀粉酶。

在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括：免疫组化试剂。

在另一优选例中，所述的试剂盒中，所述的免疫组化试剂包括(但不限于)：显色试剂，二甲苯，乙醇，H₂O₂甲醇液，抗原修复液，封闭液，PBS，中性树脂。

在本发明的另一方面，提供特异性检测MUC15蛋白表达水平的试剂和特异性检测p-AKT蛋白表达水平的试剂的用途，用于制备肝细胞癌预后评估的试剂盒。

在一个优选例中，所述的特异性检测MUC15蛋白表达水平的试剂是抗MUC15蛋白的抗体；和/或所述的特异性检测p-AKT蛋白表达水平的试剂是抗p-AKT蛋白的抗体。

在本发明的另一方面，提供一种肝癌预后评估的方法，所述方法包括：

(1)应用前面任一所述的试剂盒检测受试者离体肝癌组织中MUC15蛋白表达水平和p-AKT蛋白表达水平；

(2)分析蛋白表达水平，

若MUC15高表达且p-Akt低表达，则该受试者预后为低死亡率及低复发率；

若MUC15低表达且p-Akt高表达，则该受试者预后为高死亡率及高发率；