[发明专利]一种盐酸氨基葡萄糖硫酸软骨素片的成分测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及药品检测领域，尤其涉及一种盐酸氨基葡萄糖硫酸软骨素片的成分测定方法。 

背景技术

盐酸氨基葡萄糖硫酸软骨素片为含盐酸氨基葡萄糖和硫酸软骨素两种成分的复方制剂，剂型为白色薄膜衣片，每片含盐酸氨基葡萄糖375mg，硫酸软骨素300mg。每日服用剂量为：一次2片，一日2次。该制剂日最大服用剂量为盐酸氨基葡萄糖：1500mg，硫酸软骨素：1200mg。目前国内尚无盐酸氨基葡萄糖硫酸软骨素片制剂上市，作为该制剂原料的盐酸氨基葡萄糖原料及其片剂、胶囊剂采用国家标准进行质量控制，硫酸软骨素钠原料及硫酸软骨素钠片和胶囊的质控标准收载于《中国药典》2010年版二部。但是，国内外药典标准以及盐酸氨基葡萄糖片进口注册标准中均未规定有关盐酸氨基葡萄糖或硫酸软骨素的有关物质检测方法和限度要求。多年临床使用经验客观证实了这两种药物的安全性和有效性。 

盐酸氨基葡萄糖属于小分子单糖，硫酸软骨素为阴离子大分子多糖，采用液相色谱法对其进行测定是较为普遍和简便的方法，但是硫酸软骨素钠为不同聚合度的大分子多糖，利用HPLC难以对其进行分离和检测。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种可对盐酸氨基葡萄糖硫酸软骨素片制剂中可能的杂质进行定量和控制的方法。 

为了实现本发明的目的，本发明提供的技术方案：一种盐酸氨基葡萄 糖硫酸软骨素片的成分测定方法，以盐酸氨基葡萄糖作为指标成分，采用主成分自身对照法： 

①取盐酸氨基葡萄糖硫酸软骨素片研成细粉，加水后超声8-15min，充分振摇5-10min，加水溶解，摇匀； 

②取上述溶液，离心4-8min，上清液用滤膜过滤后取续滤液作为供试品溶液； 

③取上述供试品溶液，加水稀释后摇匀作为对照溶液； 

④取上述等量的供试品溶液和对照溶液注入液相色谱仪，记录色谱图至氨基葡萄糖保留时间的7-8倍。 

⑤上述步骤④中色谱条件：用氨基键合硅胶为填充剂，以磷酸盐溶液-乙腈＝(23-27)∶(73-77)为流动相，检测波长为193-197nm。 

⑥调整检测器的灵敏度，使对照溶液中氨基葡萄糖峰高为满量程的22-25％； 

⑦从氯离子峰值后开始计算，小于对照溶液氨基葡萄糖峰面积1/20的峰不计。 

优选的，所述检测器为紫外检测器。 

优选的，所述磷酸盐溶液为十二水合磷酸氢二钠和磷酸二氢钾加水溶 解并稀释，用氢氧化钠调节至PH7.8-8.2，摇匀滤过后制得。 

优选的，所述流动相流速为0.8-1.2ml/min。 

优选的，所述色谱条件中色谱柱温度为35-45℃。 

优选的，所述色谱柱为Phenomenex Luna5u NH2100A，250×4.6mm。 

采用以上技术方案的有益效果是：该方法具有通用性，操作简便，专属性强，灵敏度、准确度和精密度良好，线性范围能够满足盐酸氨基葡萄糖硫酸软骨素片中有关物质的定量检测。 

附图说明

图1为盐酸氨基葡萄糖硫酸软骨素片LC-MS检测的色谱图，其中：A-总离子流色谱图；B-氨基葡萄糖(m/z＝178)提取色谱图；C-杂质(RRT≈1.4，m/z＝417)提取色谱图； 

图2为总离子流色谱图中RT＝7.55min色谱峰(氨基葡萄糖)的质谱图，其中：m/z＝159.94、178.97、213.95、237.94的离子峰分别为[M-H-H2O]-、[M-H]-、[M-H+HCl]-以及[M+HCO3]-； 

图3为总离子流色谱图中RT＝8.99min色谱峰(双糖单元)的质谱图，其中：m/z＝355.01、378.95、416.97、432.96的离子峰分别为 [M-Na-SO3Na-CH3CO]-、[M-H-SO3Na-CH3CO]-、[M-H-SO3Na]-以及[M-H-SO3Na+NH3]-； 

图4为二维液相色谱-质谱联用方法测定RRT≈2.2杂质的质谱图，其中：A-RRT≈2.2杂质的总离子流色谱图，B-m/z＝238.86的离子提取色谱图，C-m/z＝260.85的离子提取色谱图，D-m/z＝320.92的离子提取色谱图，E-m/z＝331.91的离子提取色谱图； 

图5为RRT≈2.2杂质的总离子流色谱图中色谱峰的质谱图； 

图6为氨基葡萄糖浓度(X)-峰面积(Y)线性回归曲线(10～400ug/ml，0.04％～1.5％，n＝7)；