[发明专利]含基因工程抗体基因表达盒的微环DNA重组母质粒、含该表达盒的微环DNA及应用

权利要求书

1.一种含基因工程抗体基因表达盒的微环DNA重组母质粒，其特征在于，所述微环DNA重组母质粒是在微环DNA空质粒的多克隆位点中插入基因工程抗体基因表达盒的基因序列组合而成，其中，所述微环DNA空质粒为p2ФC31质粒或pMC.BESPX质粒，所述基因工程抗体基因表达盒包括依次连接的启动子、编码免疫球蛋白κ链信号肽的碱基序列、编码Flag标签的碱基序列、基因工程抗体基因、编码组氨酸His6标签的碱基序列、终止密码子和polyA加尾信号。

2.如权利要求1所述的含基因工程抗体基因表达盒的微环DNA重组母质粒，其特征在于，所述基因工程抗体基因具有编码基因工程抗体的碱基序列，所述基因工程抗体为双靶向特异性抗体，所述双靶向特异性抗体具有靶向免疫效应细胞抗原表位的结合位点和肿瘤细胞抗原表位的结合位点。

3.如权利要求2所述的含基因工程抗体基因表达盒的微环DNA重组母质粒，其特征在于，所述免疫效应细胞选自T淋巴细胞、自然杀伤细胞和巨噬细胞中的一种。

4.如权利要求2所述的含基因工程抗体基因表达盒的微环DNA重组母质粒，其特征在于，所述肿瘤细胞选自B淋巴细胞肿瘤细胞、白血病细胞、肺癌细胞、胃癌细胞、结直肠癌细胞、肝癌细胞、食管癌细胞、乳腺癌细胞、胰腺癌细胞、膀胱癌细胞和甲状腺癌细胞中的一种。

5.如权利要求2所述的含基因工程抗体基因表达盒的微环DNA重组母质粒，其特征在于，所述双靶向特异性抗体靶向结合所述肿瘤细胞的至少一个抗原表位。

6.如权利要求1所述的含基因工程抗体基因表达盒的微环DNA重组母质粒，其特征在于，所述基因工程抗体基因具有编码双特异性单链抗体氨基酸序列的碱基序列，所述双特异性单链抗体氨基酸序列的连接形式为（a）、（b）、（c）或（d）所示连接形式的一种：

（a）V_LCD19-linker1-V_HCD19-linker2-V_LCD3-linker1-V_HCD3，

（b）V_HCD19-linker1-V_LCD19-linker2-V_LCD3-linker1-V_HCD3，

（c）V_LCD19-linker1-V_HCD19-linker2-V_HCD3-linker1-V_LCD3，

（d）V_HCD19-linker1-V_LCD19-linker2-V_HCD3-linker1-V_LCD3，

其中，所述V_LCD19的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述V_HCD19的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述V_LCD3的氨基酸序列选自SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示序列中的一种，所述V_HCD3的氨基酸序列选自SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7所示序列中的一种，所述linker1的氨基酸序列选自SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10所示序列中的一种，所述linker2的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示。