[发明专利]基于细胞培养技术的人参皂甙提取方法

权利要求书

1.基于细胞培养技术的人参皂甙提取方法，其特征在于，，是一种利用多年生人参的根细胞培养，利用酶技术缩短细胞培养周期，来生产人参皂甙及多糖的方法，具体流程为：

（1）种子细胞采集：

①取新鲜的多年生人参的根清洗消毒，将洗净的人参块根用10-20%次氯酸钠溶液浸泡10-30分钟，用无菌水清洗块根至次氯酸钠无残留；

②将清洁后的块根放入打浆机加入MS培养基，每1.5g加入10ml，打浆；

③将打浆液加入纤维素酶100mg/kg，放置3-5小时，用50-80微米孔径的微孔滤器过滤，滤液用低速离心机分离，去杂质及上清液收集种子细胞；

（2）种子细胞培养：

①将收集到的种子细胞接种到含改良MS培养基的种子罐中，接种量为10-20g/L，调pH5-6，温度20-25℃；

②摇床或震荡种子罐培养20-30小时，计算细胞数量20000-40000个/ml，即可扩大培养；

（3）细胞扩大培养：

①将培养好的种子细胞接种于有机械搅拌的生物反应器内，悬浮培养，培养基用改良的MS培养基，接种量为15-25g/L，搅拌速率90-120r/min，pH5-6，通入过滤空气，速率0.01-0.05m³/s；

②加入生长素2,4-D0.5-1mg/L，果胶酶50-80mg/L，暗培养20-25天，细胞计数35000-50000/ml即停止培养；

（4）采用离心或其他方法收集人参植物细胞，即可用常规方法提取人参皂甙及多糖。