[发明专利]肉苁蓉中雌激素活性成分的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种雌激素活性成分的提取方法。

背景技术

植物雌激素(PE)是从天然植物中提取出来的一类化合物，由于其结构与内源性雌激素相似，故能够与雌激素受体(ERs)结合，进而发挥生物学效应。流行病学研究发现，植物雌激素在众多疾病预防及治疗方面发挥作用，如心血管疾病、围绝经期综合症以及与雌激素相关的肿瘤等，近年来又被称为“选择性雌激素受体调节剂”(SERMs)或中药选择性雌激素受体的调节剂。当机体机能状态失衡时，中药既可使机体从亢进转为正常，也可使机体从机能低下趋于正常，因机体所呈现病理状态的不同而产生相反的药理学作用，最终使机体达到平衡。

肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma.或管花肉苁蓉Cistanche tubulosa(Schrenk)R.Wight的干燥带鳞叶的肉质茎。肉苁蓉味甘、咸，性温，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功能。国内外研究的焦点在于其抗衰老以及雌激素受体基因水平方面。现代药理学表明，肉苁蓉除作为传统的补肾壮阳中药外，还具有增强记忆、提高免疫力等其它功能。本发明方法从体内和体外两个角度出发，分别结合两者的药理学效应对肉苁蓉雌激素活性成分进行纯化，为后续明确并且揭示肉苁蓉中具有雌激素作用的活性成分奠定基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用孔吸附树脂提取肉苁蓉中雌激素活性成分的方法。

本发明肉苁蓉中雌激素活性成分的提取方法，按以下步骤进行：

一、将肉苁蓉药材粉碎，过4号筛，然后用10倍体积的乙醇溶液将肉苁蓉药材粉末浸泡过夜，于70°C加热回流提取1h，收集提取液，得滤渣，所述乙醇溶液的体积浓度为95％；

二、然后向滤渣中加入6倍体积的乙醇溶液，于70℃加热回流提取1h，收集提取液，所述乙醇溶液的体积浓度为95％；

三、重复步骤二1次，然后合并3次提取获得的提取液，将提取液减压浓缩干燥，得浸膏；

四、用蒸馏水将浸膏溶解，作为上样样品，加入预处理后的D101型大孔吸附树脂中，使上样样品以2mL/min的流速通过D101型大孔吸附树脂，然后以体积浓度为80％的乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱，pH值为7.0，洗脱量为20BV，洗脱速度为2BV/h，收集体积浓度为80％的乙醇洗脱液，即得到肉苁蓉中雌激素活性成分。

步骤四所述D101型大孔吸附树脂的预处理方法具体为：

a.丙酮处理：取D101型大孔吸附树脂于烧杯中，加入丙酮浸泡24h，抽滤后放置在通风处将丙酮挥干，得到干树脂；

b.乙醇处理：将步骤a得到的干树脂放入烧杯中，加入无水乙醇至液面高于树脂2cm，浸泡树脂过程中用玻璃棒搅拌，每3～4小时更换乙醇，直至洗出液与水(1∶5)无混浊停止，然后用蒸馏水洗净树脂上残留乙醇；

c.酸碱处理：向层析柱中加入体积浓度为5％的盐酸溶液，使液面高于树脂2cm，浸泡4h，用蒸馏水洗至洗液的pH值为中性，继续树脂中加入体积浓度为5％氢氧化钠溶液，液面高于树脂2cm，浸泡4h，最后用蒸馏水淋洗，直至洗液pH为中性，即完成D101型大孔吸附树脂的预处理。

D101型大孔吸附树脂的装柱及再生方法具体为：

a.装柱：采用乙醇湿法装柱，将树脂装入吸附柱中，并保持95％乙醇面高出树脂面约10mm，浸泡平衡12h。用95％乙醇洗涤树脂层，直至流出液加两倍蒸馏水不呈白色浑浊，用蒸馏水继续洗至无醇味即可。

b.再生：用95％乙醇洗涤用过的树脂，直到洗脱液近无色，用蒸馏水洗涤树脂层至无醇味，必要时用1～2倍树脂体积的4％NaOH溶液洗涤树脂层，用蒸馏水洗至中性，备用。

为进一步纯化肉苁蓉拟雌激素的活性成分，采用大孔吸附树脂技术对其成分进行富集纯化。大孔吸附树脂是一类不含交换基团，且具有大孔结构的有机高聚物吸附剂，它能从中药中选择性地吸附所需的有效成分，现如今被广泛应用于有效成分及有效部位的分离纯化。本发明的目的是为了考察肉苁蓉雌激素样有效成分在D-101型大孔吸附树脂上的最佳吸附条件以及解吸附条件，以筛选出大孔吸附树脂纯化肉苁蓉雌激素样活性成分的工艺参数，为其更深一步研究奠定了基础。

通过本发明所述的方法获得的活性成分能显著增大小鼠的子宫系数，能显著提高MCF-7(人乳腺癌细胞)细胞增殖作用，具有显著的雌激素活性作用，并结合动物模型实验证实具有拟雌激素活性的作用；该有效部位可应用于在制备调节体内植物雌激素水平的药物、药物组合物的应用及制备功能食品的应用。