[发明专利]多重蓝莓病毒的早期防治技术

说明书

技术领域

本发明属于植物育种领域，具体而言，本发明涉及蓝莓培育的方法，或涉及蓝莓培育中防治或降低（多重）病毒污染的方法，另外还涉及与之配套的多重（种）病毒同步快速检测技术。

背景技术

蓝莓是杜鹃花科越橘属的灌木，其果实属于浆果，颗粒小但花青素含量高，这与草莓等蔷薇科草本植物属于截然不同的植物。

蓝莓的人工栽培历史较短，病虫害尤其是病毒病害等方面的研究还比较少，果农对病毒病害的发生发展缺乏认知和防治经验，目前通常只是以蓝莓幼苗的生根和存活来评价是否脱毒（参见中国专利201210405781.3号等）。然而，本发明人发现，大量危害蓝莓的病毒的早期（幼苗时期）症状不明显，例如：对于蓝莓红环斑病毒（Blueberry red ringspot virus，BRRV），发病植株的可分辨的叶片症状要到8、9月才出现；对于蓝莓枯焦病毒（Blueberry scorch virus，BLScV），受侵染植株要到刚开花时才明显表现出花萎蔫和死亡；对于蓝莓急性坏死病毒（Blueberry shock virus，BLShV）只在开花期花粉传播；对于蓝莓鞋带病毒(Bluebeberry shoestring virus，BSSV)，导致的叶片脱落等症状也在叶生长期才能表现出来；另外，对于蓝莓坏死环斑病毒（Tobacco ringspot virus，TRSV）、蓝莓叶片斑点病毒（Blueberry leaf mottle virus，BLMV）等，发病也基本不影响蓝莓幼苗的生根和存活。这些病毒的危害是极其有害的，不但损耗了果农的早期投入，更使得土地错过最佳利用时期，损失难以挽回。

为此，本发明人经过长期而艰苦的研究，凭借一些运气，开创性地采用以蓝莓的根尖为外植体进行脱毒和组培，相对于中国专利201210405781.3号等茎尖（芽）脱毒技术，大大降低了污染率，再配合多重病毒同步快速检测，几乎可以杜绝上述病毒的侵染。另外，在本发明中，可以不使用成本较高的WPS培养基，尤其是几乎可以不添加矿物质，方便了配制；经过优化的各种引物和配比，消除了检测中的相互干扰，可以对蓝莓组织直接实施高灵敏度的病毒检测，无需分离、纯化。

发明内容

本发明目的在于提供新的蓝莓培育的方法，或新的蓝莓培育中防治或降低（多重）病毒污染的方法，以及新的多重RT-PCR同步快速检测蓝莓病毒的方法等。本发明的方法相对于现有技术，操作更为简便，繁殖效率更高，针对的病毒污染的种类多，污染率低,苗质的长期种植优势明显。

具体而言，在第一方面，本发明提供了蓝莓培育的方法，其包括

1）对蓝莓进行预处理，获得消毒的根尖；

2）在培养基上将根尖培养成再生植株幼芽，其中所述培养基的配方是：MS基本培养基+ BA 0.1-0.3mg/L+ZT0.3-0.5 mg/L+ 2，4-D 0.1-0.3mg/L+水解乳蛋白0.8-1.2g/L+蔗糖15-25g/L；

3）在培养基上将幼芽培养成小苗，其中所述培养基的配方是：MS基本培养基+ BA 0.2-0.5 mg/L+ ZT0.3-0.5 mg/L+ NAA 0.05-0.1mg/L+水解乳蛋白0.8-1.2 g/L+蔗糖15-25g/L；

4）在培养基上使得小苗长成试管苗，其中所述培养基的配方是：MS基本培养基+ ZT0.3-0.5 mg/L+  NAA 0.1-0.3mg/L+水解乳蛋白0.8-1.2g/L+蔗糖15-25g/L；和

5）任选地，对步骤1）获得的根尖、步骤2）获得的幼芽、步骤3）获得的小苗和/或步骤4）获得的试管苗之任一或多种进行分组取样，检测样品是否侵染病毒，并弃去侵染病毒的样品所在的组。

相应地，本发明提供了蓝莓培育中防治或降低病毒污染的方法，其包括：

1）对蓝莓进行预处理，获得消毒的根尖；

2）在培养基上将根尖培养成再生植株幼芽，其中所述培养基的配方是：MS基本培养基+ ZT0.3-0.5 mg/L+ BA 0.1-0.3mg/L+2，4-D 0.1-0.3mg/L+水解乳蛋白0.8-1.2g/L+蔗糖15-25g/L；