[发明专利]多重蓝莓病毒的早期防治技术

权利要求书

1.蓝莓培育的方法（或蓝莓培育中防治或降低（多重）病毒污染的方法），其包括

1）对蓝莓进行预处理，获得消毒的根尖；

2）在培养基上将根尖培养成再生植株幼芽，其中所述培养基的配方是：MS基本培养基+ BA 0.1-0.3mg/L+ZT 0.3-0.5 mg/L+ 2，4-D 0.1-0.3mg/L+水解乳蛋白0.8-1.2g/L+蔗糖15-25g/L；

3）在培养基上将幼芽培养成小苗，其中所述培养基的配方是：MS基本培养基+ BA 0.2-0.5 mg/L+ZT 0.3-0.5 mg/L +NAA 0.05-0.1mg/L+水解乳蛋白0.8-1.2 g/L+蔗糖15-25g/L；

4）在培养基上使得小苗长成试管苗，其中所述培养基的配方是：MS基本培养基ZT 0.3-0.5 mg/L+NAA 0.1-0.3mg/L+水解乳蛋白0.8-1.2g/L+蔗糖15-25g/L；和

5）任选地，对步骤1）获得的根尖、步骤2）获得的幼芽、步骤3）获得的小苗和/或步骤4）获得的试管苗之任一或多种进行分组取样，检测样品是否侵染病毒，并弃去侵染病毒的样品所在的组。

2.权利要求1所述的方法，其中病毒是BRRV、BLScV、BLShV、TRSV和BLMV之任一或多种，优选是BRRV、BLScV、BLShV、TRSV和BLMV。

3.权利要求1所述的方法，其中，

步骤1）是：将蓝莓放入灭菌细沙内于37土3℃下进行热处理，直至抽生根系；取1-2cm长的主根根尖，消毒并水洗后，直接将前端0.1-0.2mm根尖切下作为外植体；

步骤2）是：将根尖接种在培养基上，在23土3℃、光照16土2小时∕天下培养，培养的初始六周的光强由1000土200lux渐变至4000土500lux，然后继续培养直至从根尖诱导出再生植株幼芽；

步骤3）是：将幼芽接种在培养基上，在23土3℃，光强3000土500lux、光照16土2小时∕天下培养，直至长成8-12cm cm长的小苗；和/或，

步骤4）是：将小苗接种到培养基上，在23土3℃，光强2500土500lux、光照16土2小时∕天下培养，直至长出根系。

4.权利要求1或2所述的方法，其中检测样品是否侵染病毒是通过采用由P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9和P10组成的混合引物对的RT-PCR进行检测的。

5.权利要求4所述的方法，其中混合引物对中P1：P2：P3：P4：P5：P6：P7：P8： P9：P10的含量比为0.3~0.5：0.3~0.5：0.5~0.7：0.5~0.7：0.7~0.9：0.6~0.8：0.6~0.8：0.8~1：0.8~1：0.9~1.1：0.9~1.1，优选为0.4：0.4：0.6：0.6：0.8：0.8：0.7：0.7：0.9：0.9。

6.多重RT-PCR同步快速检测蓝莓病毒的方法，其中采用由P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9和P10组成的混合引物对。

7.权利要求6所述的方法，其中混合引物对中P1：P2：P3：P4：P5：P6：P7：P8：P9：P10：的含量比为0.3~0.5：0.3~0.5：0.5~0.7：0.5~0.7：0.7~0.9：0.6~0.8：0.6~0.8：0.8~1：0.8~1：0.9~1.1，优选为0.4：0.4：0.6：0.6：0.8：0.8：0.7：0.7：0.9：0.9。

8.蓝莓根尖和/或由P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9和P10组成的混合引物对在蓝莓培育和/或其中防治或降低病毒污染中的应用。

9.权利要求8所述的应用，其中蓝莓培育和/或其中防治或降低病毒污染是权利要求1-5之任一所述的方法。

10.权利要求8所述的应用，其中病毒是BRRV、BLScV、BLShV、TRSV和BLMV之任一或多种，优选是BRRV、BLScV、BLShV、TRSV和BLMV。