[发明专利]抗IL-1β人源化单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗IL-1β人源化单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

IL-1β，即白细胞介素1β，是IL-1家族中的重要成员，其前体蛋白分子量为31KD，成熟的IL-1β分子量大小为17KD。IL-1β主要参与炎症反应、自身性免疫疾病和白血病的发生过程，其对血管内皮细胞、巨噬细胞以及T细胞和B细胞也有直接的影响。IL-1β与许多病理条件下的炎症都有关，包括感染（病毒，细菌，真菌和寄生虫），内毒素休克，关节炎，类风湿关节炎，盆腔炎，多发性硬化症，哮喘，骨性关节炎，牛皮癣，阿尔茨海默氏病，Crohn氏病，Peyronies的疾病，心脏疾病（如动脉粥样硬化），结肠癌，腹腔疾病，胆囊疾病，藏毛性疾病，腹膜炎，脑膜炎，其他自身免疫性疾病，胰腺炎，外伤（手术），移植物抗宿主病和移植排斥反应等。IL-1β甚至与癌症、骨质疏松症和疼痛信号传导也有关。因此，IL-1β是一个很具潜力的用于预防及治疗这些疾病的药物靶点。

最初科学家们制备获得的是鼠源单克隆抗体，用于中和IL-1β治疗。但研究发现鼠源单克隆抗体作为治疗药物存在许多缺陷，主要是因为其用于人体具有强烈的免疫原性，导致半衰期短，临床疗效低且副作用大。随着人源化单克隆抗体技术的发展，逐渐克服了鼠源单克隆抗体的缺陷。但此类抗体仍有存在与靶点结合亲和力低的问题，从而影响了药物的有效性。因此，本领域迫切需要建立高亲和力，高特异性的，人源或人源化的单克隆抗IL-1β抗体，以进一步提高临床应用的安全性和有效性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服现有的抗IL-1β非人源化单克隆抗体免疫原性强、半衰期短，而抗IL-1β人源化单克隆抗体亲和力不高、特异性不强的缺陷，提供一种亲和力高、特异性强的抗IL-1β人源化单克隆抗体及其制备方法和应用。

本发明提供的技术方案之一是：一种分离的蛋白质，其是一种抗IL-1β单链抗体，其包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区是在如序列表中SEQ ID No:1所示氨基酸序列的肽链的第57位和第60位氨基酸中的一位或两位经过取代一个氨基酸所形成的肽链，和/或，所述轻链可变区是在如序列表中SEQ ID No:2所示氨基酸序列的肽链的第27位、28位和第29位氨基酸中的一位或多位经过取代一个氨基酸所形成的肽链。

其中，所述重链可变区较佳地为：将序列表中SEQ ID No:1所示氨基酸序列的肽链的第57位的丝氨酸突变为丙氨酸；所述氨基酸序列中第60位的苯丙氨酸突变为异亮氨酸。

所述轻链可变区较佳地为：将序列表中SEQ ID No:2所示氨基酸序列的肽链的第27位的甘氨酸突变为丝氨酸或精氨酸；所述氨基酸序列中第28位的天冬酰胺突变为缬氨酸或苏氨酸；所述氨基酸序列中第29位的异亮氨酸突变为缬氨酸。

其中所述蛋白质的制备方法为本领域常规的制备方法。所述制备方法较佳地为：从重组表达该蛋白质的表达转化体中分离获得或者通过人工合成蛋白质序列获得。所述的从重组表达该蛋白质的表达转化体中分离获得优选如下方法：将编码所述蛋白质并且带有点突变的核酸分子克隆到重组载体中，将所得重组载体转化到转化体中，得到重组表达转化体，通过培养所得重组表达转化体，即可分离纯化获得所述蛋白质。

本发明中，所述蛋白质的重链可变区和轻链可变区可由本领域常规的链接短肽进行链接，从而构成包含所述重链可变区和所述轻链可变区的单链抗体。所述的链接短肽的序列较佳地为GGGGSGGGGSGGGGS。

本发明提供的技术方案之二是：一种分离的蛋白质，其是一种抗IL-1β全长IgG抗体，其包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区是在如序列表中SEQ ID No:1所示氨基酸序列的肽链的第57位和第60位氨基酸中的一位或两位经过取代一个氨基酸所形成的肽链，和/或，所述轻链可变区是在如序列表中SEQ ID No:2所示氨基酸序列的肽链的第27位、28位和第29位氨基酸中的一位或多位经过取代一个氨基酸所形成的肽链。

其中，所述重链可变区较佳地为：将序列表中SEQ ID No:1所示氨基酸序列的肽链的第57位的丝氨酸突变为丙氨酸；所述氨基酸序列中第60位的苯丙氨酸突变为异亮氨酸。

所述轻链可变区较佳地为：将序列表中SEQ ID No:2所示氨基酸序列的肽链的第27位的甘氨酸突变为丝氨酸或精氨酸；所述氨基酸序列中第28位的天冬酰胺突变为缬氨酸或苏氨酸；所述氨基酸序列中第29位的异亮氨酸突变为缬氨酸。