[发明专利]高效液相色谱法测定多尼培南和/或有关物质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体涉及高效液相色谱法测定多尼培南和/或有关物质的方法。

背景技术

多尼培南(Doripenem)，化学名：(+)-(4R,5S,6S)-6-[(1R)-1-羟基乙基]-4-甲基7-氧代-3-[[(3S,5S)-5-[(氨基磺酰氨基)-甲基]-3-吡咯烷基]硫]-1-氮杂双环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，结构如(I)所示，由日本盐野义公司(Shionogi)研发，2005年首次在日本上市，商品名为“Finibax”，属1-β甲基型碳青霉烯类抗生素，具有广谱的抗菌活性。

有关物质，也称为杂质，主要是在生产过程中带入的起始原料、中间体、聚合体、副反应产物，以及贮藏过程中的降解产物等。碳青霉烯类抗生素中的开环降解物、酸解产物、聚合物等杂质是引起过敏的主要原因。因此，有关物质研究是多尼培南质量研究中关键性的项目之一。理想的多尼培南质量检测方法，应该在保证多尼培南与杂质实现基线分离的同时，分离、检测到尽可能多的杂质。

现有技术中测定多尼培南含量及纯度的方法都使用通用型的C18或C8柱。如中国发明专利申请（公开号CN1432016A）中公开了一种多尼培南的含量测定方法，其采用高效液相色谱仪、紫外吸收光度计、十八烷基硅烷化硅胶（L-column ODS）色谱柱检测，色谱条件以对乙酰氨基苯为内标物质，流动相为：pH5.8的2mmol/L磷酸盐缓冲液/丙烯腈混合溶液（191:9），检测波长为240nm。

中国发明专利申请（公开号为CN102977101A）公开了多尼培南一水合物纯度检测方法，其HPLC实验条件/参数：色谱柱为Zorbax SB-C18，4.6×250mm5μm；流动相为水∶甲醇(90∶10)，加入三乙胺0.3％，以磷酸调节PH5.0；流速为1.5mL/min；检测波长为220nm；柱温为30℃；进样量20μL。

上述两种方法的不足之处在于：1）所用L-column ODS和Zorbax SB-C18色谱柱都采用通用型十八烷基硅烷键合硅胶填料（Octadecylsilyl，简称ODS）。在流动相含水量高的情况下会发生C18层链倒伏塌陷，损失柱效和寿命；2）主峰与杂质峰、杂质与杂质之间不能实现良好的分离，结果不准确，不能用于有关物质的检测；3）使用内标物质，操作繁琐。

公开号为CN101191787A的中国发明专利申请还公开了一种多尼培南含量测定的方法，其采用高效液相色谱法、紫外检测器、辛烷基硅烷键合硅胶色谱柱检测（C8柱），流动相为pH为5.0～6.0的0.01～0.2mol/L的磷酸钠盐水溶液/乙腈混合溶液（100:10～100:1），检测波长为292nm。该方法的不足之处在于：1）主峰与杂质峰、杂质与杂质之间不能实现良好的基线分离，测定结果不准确；2）多尼培南出峰时间不稳定，批间相差约5min，不利于杂质研究。3）该方法不适用于多尼培南有关物质的测定。

因此，现有技术中利用高效液相色谱法测定多尼培南的方法，存在主峰与杂质峰、杂质与杂质之间不能实现良好的基线分离，批间多尼培南出峰时间不稳定，批与批之间和柱与柱之间的重现性差，测定结果不准确的缺陷，且缺少能用于测定有关物质的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种高效液相色谱法测定多尼培南和/或有关物质的方法。该方法实现了批间多尼培南吸收峰保留时间稳定、各峰良好的基线分离，从而使测定结果准确，并能同时测定多尼培南及有关物质的含量。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种高效液相色谱法测定多尼培南和/或有关物质的方法，采用紫外检测器进行测定，所述方法采用的固定相为键合极性基团的烷基硅烷键合硅胶。

优选的，所述固定相选自键合极性基团的八烷基硅烷键合硅胶或键合极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶；优选为键合极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶。

优选的，本发明所述方法的色谱柱选自ODS-AQ色谱柱、Polar-RP色谱柱、Hydro-RP色谱柱或AQ-C18极限柱。

更优选的，本发明所述方法采用的色谱柱选自优选Ultimate AQ-C18柱，Welch Polar-RP C18色谱柱，ZORBAX SB-Aq C18色谱柱，YMC-Pack ODS-AQ C18色谱柱，ProntoSIL C18AQ色谱柱，CenturySIL C18AQ色谱柱，Synergi Hydro-RP C18色谱柱或Vertex AQ-C18色谱柱；更优选Welch Polar-RP C18色谱柱。