[发明专利]高效液相色谱法测定多尼培南和/或有关物质的方法

权利要求书

1.一种高效液相色谱法测定多尼培南和/或有关物质的方法，采用紫外检测器进行测定，其特征在于，所述方法的固定相为键合极性基团的烷基硅烷键合硅胶。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固定相选自键合极性基团的八烷基硅烷键合硅胶或键合极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶；优选为键合极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法采用的色谱柱选自ODS-AQ色谱柱、Polar-RP色谱柱、Hydro-RP色谱柱或AQ-C18极限柱；

优选Ultimate AQ-C18柱，Welch Polar-RP C18色谱柱，ZORBAX SB-Aq C18色谱柱，YMC-Pack ODS-AQ C18色谱柱，ProntoSIL C18AQ色谱柱，CenturySIL C18AQ色谱柱，Synergi Hydro-RP C18色谱柱或Vertex AQ-C18色谱柱；

更优选Welch Polar-RP C18色谱柱。

4.根据权利要求1至3任一所述的方法，其特征在于，所述方法的检测波长为230nm。

5.根据权利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于，所述方法的流动相由A液和B液组成；A液为浓度为0.01～0.2mol/L，优选为0.02mol/L的磷酸的钠盐或钾盐水溶液，B液为乙腈。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，采用等度洗脱，A液与B液的体积比为90:10～97:3，优选为94:6～97:3，更优选为94:6～95:5，进一步优选为94:6；

或，采用梯度洗脱：

0min时，A液与B液的体积比为97:3；

第15min开始，A液与B液的体积比缓慢、匀速地调整为85:15，持续到第40min；

第41min开始至第45min，A液与B液的体积比缓慢、匀速地调整为97:3，并保持到洗脱终点。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述流动相A液为磷酸的钾盐水溶液，更优选为KH₂PO₄水溶液。

8.根据权利要求5至7任一所述的方法，其特征在于，所述流动相A液的pH为4.7～6.0；优选pH值为5.7；用KOH、NaOH或磷酸来调节pH值。

9.根据权利要求1至8任一项所述的测定多尼培南含量和/或有关物质的方法，其特征在于，所述方法的检测柱温为20～30℃；优选25℃。

10.一种高效液相色谱法测定多尼培南和/或有关物质的方法，采用紫外检测器进行测定，具体步骤包括：

色谱条件：

固定相：键合极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶，粒径5μm；

流动相：用KOH调节pH=5.7的0.02mol/L的K₂HPO₄水溶液:乙腈=94:6（v/v）,等度洗脱；

流速：1.0ml/min；

柱温：25℃；

紫外检测器，检测波长230nm；

供试品溶液：

精密称取多尼培南原料药、粗品或多尼培南注射用冻干粉25mg,置10mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

对照品溶液：

精密量取所述供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；

测定：

分别吸取供试品溶液和对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，测量供试品溶液色谱图上各吸收峰的峰面积，计算多尼培南归一含量，将杂质峰的峰面积与对照品溶液主成分的峰面积比较，计算有关物质的含量；或

色谱条件：

固定相：键合极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶，粒径5μm；

流动相：A液为用KOH调节pH=5.7的0.02mol/L K₂HPO₄水溶液，B液为乙腈，按如下程序进行梯度洗脱：

0min时，A液与B液的体积比为97:3；

第15min开始，A液与B液的体积比缓慢、匀速地调整为85:15，持续到第40min；

第41min开始至第45min，A液与B液的体积比缓慢、匀速地调整为97:3，并保持到洗脱终点；

流速：1.0ml/min；

柱温：25℃；

紫外检测器，检测波长230nm；

供试品溶液：

精密称取多尼培南原料药、粗品或多尼培南注射用冻干粉25mg,置10mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

对照品溶液：

精密量取上述供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；

测定：

分别吸取供试品溶液和对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，测量供试品溶液色谱图上各吸收峰的峰面积，计算多尼培南归一含量，将杂质峰的峰面积与对照品溶液主成分的峰面积比较，计算有关物质的含量。