[发明专利]一种处理畜禽养殖污水的复合生物菌剂及其制造方法

权利要求书

1.一种畜禽养殖污水处理复合生物菌剂，其特征为复合生物菌剂含有解淀粉芽孢杆菌IAE（Bacillus amyloliquefaciens IAE）、棘孢木霉12（Trichoderma asperellum 12）和苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）；

其中所述的一株解淀粉芽孢杆菌IAE（Bacillus amyloliquefaciens IAE），于2013年3月15日保藏于中国典型微生物菌种保藏中心，保藏地址为武汉市武昌珞珈山，保藏编号CCTCC NO：M 2013086，简称为解淀粉芽孢杆菌CCTCC NO：M 2013086；

所述的一株棘孢木霉12（Trichoderma asperellum 12），于2013年5月16日保藏于中国典型微生物菌种保藏中心，保藏地址为武汉市武昌珞珈山，保藏编号CCTCC NO：M 2013213，简称为棘孢木霉CCTCC NO：M 2013213。

2.权利要求1所述一种畜禽养殖污水处理复合生物菌剂的制备方法，其特征在于按如下步骤实现：

1）将解淀粉芽孢杆菌CCTCC NO：M 2013086菌株接种到液体种子培养基，培养的条件为：摇床震荡170rpm，培养温度37℃，培养24小时，菌落形成单位≥1×10⁹ cfu ml^-1；所用的液体种子培养基配方为，按照1L培养基配制：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 10g，自来水1000ml，pH范围7.0-7.5，121℃灭菌20min；将解淀粉芽孢杆菌CCTCC NO：M 2013086种子按照5%体积百分比接种到液体发酵培养基，进行液体发酵生产，其发酵生产的条件为：培养温度28~35℃，溶氧通气量范围为30～100％，150~220rpm，发酵后期发酵液该菌株的菌落形成单位≥1×10⁹ cfu ml^-1，发酵液低温储存备用；所用的液体发酵培养基的配方为，按照1L培养基配制：葡萄糖80g，谷氨酸钠50g，(NH₄)₂SO₄ 8g，NaCl 5g，K₂HPO₄·3H₂O 2g，MnSO₄·7H₂O 0.25g，MnSO₄?H₂O 0.03 g，蒸馏水1000ml，pH值自然，115℃灭菌30min；

2）棘孢木霉CCTCC NO：M 2013213接种到PDA培养液中，进行液体种子培养，培养条件为：摇床震荡120rpm，培养温度25℃，培养72小时，菌落形成单位≥0.5×10⁸ cfu ml^-1；所用的液体的种子PDA培养基的配方为，按照1L培养基配制：用200 g土豆削皮后切成小块放到水里煮，沸腾后煮30 min，用纱布过滤后，滤液加20 g普通蔗糖，定容至1000 ml，pH值自然，115℃灭菌30 min；将棘孢木霉CCTCC NO：M 2013213种子按照10%体积百分比接种到液体发酵培养基，进行液体发酵生产，其发酵生产的条件为：初始pH自然，培养温19~22℃，溶氧通气量范围为30～100％，90~170rpm，发酵中后期形成菌丝球用转速250rpm搅拌打碎成菌丝片段，发酵棘孢木霉CCTCC NO：M 2013213菌株的菌落形成单位≥0.5×10⁸ cfu ml^-1，发酵液低温存贮备用；所用液体发酵培养液配制方法为（以配制1L培养基为例）：用100 g土豆削皮后切成小块放到水里煮，沸腾后煮30 min，经过滤后滤液中加5g普通蔗糖和2g水稻秸秆粉，定容至1000 ml，pH值自然，115℃灭菌30 min；

3）苏云金芽孢杆菌接种到液体种子培养基，培养条件为：摇床震荡170rpm，培养温度37℃，培养24小时，菌落形成单位≥1×10⁹ cfu ml^-1；所用的液体的种子培养基的配方为，按照1L培养基配制：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 10g，自来水1000ml，pH范围7.0-7.5，121℃灭菌20min；将苏云金芽孢杆菌种子按照5%体积百分比接种到液体发酵培养基，进行液体发酵生产，其发酵生产的条件为：初始pH范围为7.0~7.5，培养温度25~33℃，溶氧通气量范围为30～100％，150-220rpm，发酵后期发酵液该菌株的菌落形成单位≥1×10⁹ cfu ml^-1，发酵液储存备用；所用的液体发酵培养基的配方为，按照1L培养基配制：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 10g，自来水1000ml，pH范围7.0-7.5，121℃灭菌20min；

4）将微生物发酵液菌种按照解淀粉芽孢杆菌CCTCC NO：M 2013086：棘孢木霉CCTCC NO：M 2013213：苏云金芽孢杆菌=10：8：1体积比复合，用氢氧化钙调节PH值为8.0~8.5， 后继续搅拌机搅拌0.5~1小时让微生物菌体稳定和进入休眠状态，复合物在常温静置2小时，灌装，即为一种畜禽养殖污水处理复合生物菌剂。