[发明专利]一种磷脂酶A1的固定化方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品和生物技术领域。具体而言，本发明涉及一种磷脂酶A1的固定化方法。 

背景技术

磷脂酶A1是一种羧酸酯水解酶，同时具有脂肪酶和磷脂酶活性，和脂肪酶相比，此酶水解活力高，价格便宜，应用前景广阔。 

酶固定化技术是指采用一定技术手段将酶束缚于一定区域内，使其可以进行其特有的催化反应，并可回收重复利用的一种技术。通过此技术可以提高酶的使用效率，经固定的酶可以进行与产物的分离并可重复利用，提高酶的稳定性，并且便于连续化和自动化操作。 

现有文献专利中描述的可用于油脂改性，酯交换，酯化等的固定化酶技术主要为脂肪酶的固定化，例如在EP0140542中描述了一种关于米黑根毛霉产脂肪酶固定于大孔型弱碱性阴离子交换树脂上，并用于酯交换或者酸解反应。在CN1280189A中描述了一种铜绿假单孢菌产脂肪酶的固定化方法，应用于制备旋光化合物的方法。 

然而，关于磷脂酶固定化的技术较少，且大部分应用在油脂脱胶等磷脂酶常用的情况。在CN101092587A中描述了一种包埋法固定化磷脂酶的方法，此方法以海藻酸钠、壳聚糖为载体，以磷脂酶A2为包埋对象，固定化后主要用于大豆毛油的精炼过程中。在CN1141343A中介绍了一种关于磷脂的酯交换方法，其中涉及了一种对细胞外磷脂酶A2的固定化方法，以氨基丙基化的玻璃珠为载体，用交联-吸附的方法将来源于Lecitase固定之上，来催化甘三酯和磷脂的酯交换反应。在CN102199634A中，描述了一种以DA201大孔型吸附树脂为载体的固定化过程，固定化产品主要用于富含甘二酯的功能性油脂的制备。 

另外，“磷脂酶Lecitase ultra的固定化、结构表征及性质研究（刘宁、赵谋明、汪勇、付敏）”中，描述了一种用大孔吸附型树脂DA201为载体固定磷脂酶 lecitase ultra的方法，但没有提到应用。 

“Hugo S.Garcia、In-Hwan Kim，Enrichment of lecithin with n-3fatty acids by acidolysis using immobilized phospholipase A1”中，描述了一种用酚醛型吸附树脂固定磷脂酶A1的方法，并用于DHA型磷脂的生产，在底物摩尔比1：8，反应时间24h，温度50℃的情况下，DHA接入率达到35%。 

“Ning Liu、Yong Wang，Immobilization of lecitase ultra for production of diacylglycerols by glycerolysis of soybean oil”中，描述了一种用大孔型吸附树脂固定磷脂酶A1的方法，并应用于甘二酯的生产，在合适的条件下，固定化酶重复35次，DAG含量从55%下降至25%。 

但是，上述已有的关于磷脂酶A1的固定化方法，在应用上均存在一定的缺陷，尤其是在生产甘二酯的情况下，固定化磷脂酶的应用范围窄，效果不突出，在工业上很难实施大规模的应用。另外，应用于DHA磷脂生产的情况下，反应时间过长、容易造成DHA的氧化。并且，在现有文献和专利中少有提到固定化磷脂酶A1可用于酯化反应，关于固定化酶的酯化，目前市场上只有诺维信公司产的novozyme435有较强的酯化功能，但价格昂贵。 

实际上，酯化反应在油脂工业生产上有很重要的应用，可用来制备甘二酯，功能性甘三酯，生物柴油等产品。另外，酸解反应可以用于制备磷脂型DHA等功能性磷脂。 

因此，本领域迫切需要开发出新的磷脂酶A1的固定化方法，使得固定化的磷脂酶既具有较强的酯化功能，并且可以进行磷脂的酸解反应，从而扩大磷脂酶在油脂工业的应用范围。 

发明内容

本发明的目的之一是提供一种磷脂酶A1的固定化方法。本发明的另一目的是提供一种固定化的磷脂酶A1。另外，本发明的目的还在于提供本发明的固定化磷脂酶A1在工业中的应用。 

本发明的第一方面，提供了一种磷脂酶的固定化方法，所述方法包括步骤： 

a）将选自大孔型吸附树脂或离子交换树脂的载体与磷脂酶A1接触，使所述磷脂酶A1固定于所述载体； 

b)干燥步骤a)中所得的固定有磷脂酶A1的载体，以获得所述固定化磷脂酶A1。 

在本发明的一个优选实施例中，所述载体与磷脂酶接触前，还包括前处理的步骤。