[发明专利]一种豆乳基质及其用于短稳杆菌GXW15-4发酵的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种适合短稳杆菌GXW15-4发酵的基质及其用该基质发酵短稳杆菌GXW15-4的方法，属于微生物技术领域。 

背景技术

多种植物的主要害虫是鳞翅目害虫，例如菜青虫、小菜蛾、斜纹夜蛾、水稻纵卷叶虫、大螟、二化螟、三化螟、棉蛉虫、果树刺蛾。 

对植物施用农药是防治植物害虫的主要措施。随着社会的发展和人类的进步，人们对农产品化学污染越来越担忧，迫切期望以生物农药替代化学农药。为此，国际上很多发达国家投入相当大的人力、财力发展生物农药，但生物杀菌剂产品开发的较多，生物杀虫剂产品开发进展较慢。就对化学农药抗药性较强的小菜蛾、斜纹夜蛾、水稻纵卷叶螟等重大鳞翅目害虫的生物农药开发应用而言，国内外市场上主要产品仍然是德国人贝尔奈(Berliner)于100年前发现并研究制造成功的苏云金杆菌杀虫剂（Bt），目前为止尚未有其他更好的替代产品。 

近年来，国内外农药市场上出现了一些植物源杀虫剂品种，但因植物源杀虫剂受植物品种和资源限制，产业化生产难度较大，且因植物源杀虫剂开发成本普遍较高，降低了人们选择使用植物源杀虫剂的积极性。 

短稳杆菌杀虫剂是本公司用短稳杆菌GXW15-4制备出来的一种全新的生物杀虫剂，有希望成为苏云金杆菌杀虫剂（Bt）较理想的替代产品。 

短稳杆菌(Empedobacter brevis)GXW15-4，是由罹病死亡的植物害虫尸体提取、筛选出的植物害虫病原菌。该菌于2002年12月11日保藏在中国典型培养物保藏中心（简称CCTCC），保藏编号CCTCC NO：M202046。保藏单位地址：中国，武汉，武汉大学。该菌通常在鳞翅目昆虫体尸体基质条件下繁殖。实验室和小试过程中繁殖该菌通常在基质中加入3%的蚕蛹粉。在工厂化生产短稳杆菌杀虫剂的情况下，难以从市场上采购到大量的蚕蛹粉。 

发明内容

本发明是针对现有技术存在的缺陷，提出一种用豆乳基质替代蚕蛹粉基质生产短稳杆菌杀虫剂的方法，用该基质生产的短稳杆菌杀虫剂能够保持其对植物鳞翅目害虫较高的杀虫活性，对人、畜、禽安全，对环境无污染。 

豆乳基质中各组分重量份数为：脱皮的食用大豆蛋白粉5～6份、脱皮的食用玉米粉2～3份、钙粉1份、蔗糖1.5份、食盐0.5份、水87.8份、鲜牛奶或者鲜羊奶1.2份。 

豆乳基质生产短稳杆菌杀虫剂的方法包括以下步骤： 

步骤一、按各组分重量份数配备成的基质原料80kg投入100L的第一级发酵罐中，经121⁰C蒸汽消毒25分钟、冷却至37⁰C时接种短稳杆菌GXW15-4原种，搅拌培养24小时；

步骤二、按步骤一相同的比例将重新配置的基质原料720kg投入1000L的第二级发酵罐中，经步骤一相同的高温灭菌、冷凝处理后，将第一级发酵产物投入第二级发酵罐中，搅拌培养24小时；

步骤三、按步骤一相同的比例将再次配置的基质原料7200kg投入10000L的第三级发酵罐中，经步骤一相同的高温灭菌、冷凝处理后，将第二级发酵产物投入第三级发酵罐中，搅拌培养36小时；

步骤四、第三给发酵产物经高速剪切、砂磨后包装形成悬浮状短稳杆菌杀虫剂产品。

本发明生产出来的短稳杆菌杀虫剂稀释成1-1.3亿孢子/ml含量的溶液，喷施于植物表皮后，短稳杆菌GXW15-4经口吸进入植物害虫体内，24小时内导致植物鳞翅目害虫病变并逐步死亡。 

附图说明

图1 为豆乳基质生产短稳杆菌杀虫剂工艺流程图。 

具体实施方式

（一）短稳杆菌(Empedobacter brevis)GXW15-4，是由罹病死亡的植物害虫尸体提取、筛选出的植物害虫病原菌。该菌于2002年12月11日保藏在中国典型培养物保藏中心（简称CCTCC），保藏编号CCTCC NO：M202046。保藏单位地址：中国，武汉，武汉大学。短稳杆菌GXW15-4通常须在鳞翅目昆虫尸体基质条件下繁殖。本发明是以牛乳或者羊乳替代昆虫尸体制备成的短稳杆菌GXW15-4发酵基质，具体包括以下重量份数的各组分：脱皮的食用大豆蛋白粉5份、脱皮的食用玉米粉3份、钙粉1份、蔗糖1.5份、食盐0.5份、水87.8份、鲜牛奶或者鲜羊奶1.2份；也可以包括以下重量份数的各组分：脱皮的食用大豆蛋白粉6份、脱皮的食用玉米粉2份、钙粉1份、蔗糖1.5份、食盐0.5份、水87.8份、鲜牛奶或者鲜羊奶1.2份。