[发明专利]一种大肠杆菌重组酶液的大规模保存方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种大肠杆菌重组酶液的大规模保存。

背景技术

随着生物技术的不断发展及应用，越来越多的工业酶通过重组大肠杆菌进行生产，由于应用背景的需求不同，一些酶往往只是进行了初步纯化，并以酶液的形式进行贮存。由于酶液中杂质含量较高，不同于实验室用的小规模酶液，往往在贮存过程中会引起酶的变性与析出，导致酶液酶活下降。而且在4℃-20℃长期贮存时，还容易滋生杂菌，导致酶液质量严重下降。目前酶液保存的方法只是简单的采用了一些缓冲液及防腐剂，效果一般，因此一种能够有效大规模贮存酶液的方法有待优化。

发明内容

针对以上所述现存工艺的一些缺点，本发明的目的是提供一种大肠杆菌重组酶液的大规模保存方法。

本发明的具体方案如下：一种用大肠杆菌重组酶液的大规模保存方法，其特征在于：经重组大肠杆菌发酵、提取后获得的重组酶液，加入pH为6.5~8.0的Tris·HCl、甘油、Mg²⁺和苯甲酸钠，控制酶液pH在6.5~8.0范围内，分装后-20℃~20℃保存。

进一步地，酶液中加入的Tris·HCl，母液浓度为1~3M，终浓度为0.01~0.05M。

进一步地，酶液中加入的甘油终浓度为3%~10%。

进一步地，酶液中加入的Mg²⁺终浓度为1~10mM。

进一步地，酶液中加入的苯甲酸钠为0.01%~0.1%。

进一步地，加入Mg²⁺的形式为Mg²⁺的可溶性无机盐及其结晶水合物，例如包括但不限于MgCl₂、MgSO₄及其结晶水合物。

本发明能够使酶液在长期贮存过程中保持pH的稳定，为酶液提供一个稳定的酸碱环境。并且通过Mg²⁺与其它缓冲液的共同作用，有效保持了酶分子空间结构的稳定性，有效防止了酶液在贮存过程中蛋白的析出及酶的变性，保证了酶的蛋白结构及活力的稳定。同时也防止了酶液在贮存过程中滋生杂菌。

具体实施方式

实施例1

经发酵、提取后制备的重组酶液100L，调pH 7.2，加入3M Tris·HCl（pH7.2）1L，甘油5L，苯甲酸钠100g，混匀后检测pH在7.2，分装后4℃保存40d，酶活损失36.6%

实施例2

经发酵、提取后制备的重组酶液100L，调pH 7.2，加入3M Tris·HCl（pH7.2）1L，甘油5L，MgSO₄·7H₂O 123g，苯甲酸钠100g，混匀后检测pH在7.2，分装后4℃保存40d，酶活损失10.2%。

实施例3

经发酵、提取后制备的重组酶液1000L，调pH 6.8，加入3M Tris·HCl（pH6.8）3.3L，甘油30L，MgSO₄·7H₂O 246g，苯甲酸钠100g，混匀后检测pH在6.8，分装后-20℃保存60d，酶活损失4.9%。

实施例4

经发酵、提取后制备的重组酶液1000L，调pH 6.5，加入3M Tris·HCl（pH6.5）16.5L，甘油100L，MgSO₄·7H₂O 2460g，苯甲酸钠1000g，混匀后检测pH在6.5，分装后-20℃保存60d，酶活损失3.8%。

实施例5

经发酵、提取后制备的重组酶液1000L，调pH 8.0，加入1M Tris·HCl（pH8.0）20L，甘油60L，MgSO₄ 240.83g，苯甲酸钠500g，混匀后检测pH在8.0，分装后-20℃保存100d，酶活损失5.3%。

实施例6

经发酵、提取后制备的重组酶液1000L，调pH 7.0，加入2M Tris·HCl（pH7.0）10L，甘油60L，MgCl₄·6H₂O 609g，苯甲酸钠600g，混匀后检测pH在7.0，分装后-20℃保存60d，酶活损失2.1%。

实施例7

经发酵、提取后制备的重组酶液1000L，调pH 7.0，加入2M Tris·HCl（pH7.0）10L，甘油60L，MgCl₄ 380.84g，苯甲酸钠400g，混匀后检测pH在7.0，分装后-20℃保存60d，酶活损失1.5%。

实施例8

经发酵、提取后制备的重组酶液1000L，调pH 7.0，加入2M Tris·HCl（pH7.0）10L，甘油60L，Mg(NO₃)₂·6H₂O 1538.46g，苯甲酸钠500g，混匀后检测pH在7.0，分装后-20℃保存60d，酶活损失3.5%。