[发明专利]一种筛选乳腺癌干细胞的三维培养方法有效
| 申请号： | 201310299224.2 | 申请日： | 2013-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN103396995A | 公开（公告）日： | 2013-11-20 |
| 发明（设计）人： | 曾宏彬;戴果鲜;康涛;郭玲玲;陈丽丹 | 申请（专利权）人： | 广州赛哲生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/095 | 分类号： | C12N5/095 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 谭英强 |
| 地址： | 510300 广东省广州市国际生物岛螺*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 筛选 乳腺癌 干细胞 三维 培养 方法 | ||
1.一种筛选乳腺癌干细胞的三维培养方法，包括如下步骤：
1)获得单细胞状态的人乳腺癌细胞，加入完全培养基中，制成细胞悬液，细胞密度调整至1×104～1×105个/mL；
2)将鲑鱼凝血酶加入细胞悬液，使凝血酶的浓度为1～4U/mL，混合均匀，得到混合液A，冰浴备用；
3)用完全培养基将鲑鱼胶原蛋白原稀释至1.5～3mg/mL，得到混合液B，冰浴备用；
4)将混合液A与混合液B等体积混匀，得到混合液C，接种至细胞培养板，36～38℃下保温，使其凝固成软凝胶；
5)在软凝胶上方加入体积为混合液C1～2倍的完全培养基，置于细胞培养箱内培养，每2～4天更换培养基一次；
6)培养至9～11天，即得到乳腺癌干细胞微球。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）中使用的人乳腺癌细胞为MCF-7。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述完全培养基为添加有10～15v/v%胎牛血清、80～150U/ml青霉素和80～150mg/ml链霉素的高糖DMEM培养基。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2）中，混合液A中鲑鱼凝血酶的浓度为4U/mL。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤3）中，混合液B中鲑鱼纤维蛋白原的浓度为2mg/mL。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤5）中，培养条件为：37.0～37.5℃，4.9～5.1%CO2，饱和湿度。
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