[发明专利]一种曲伏前列素含量及有关物质的分析方法

说明书

技术领域：

本发明涉及使用超高效液相色谱测定曲伏前列素含量及有关物质的方法。

背景技术：

目前，液相色谱是现代色谱技术中最活跃的分析方法之一。在环境科学、生化、食品工业、农业、药物分析等多个领域的应用较为普遍。近年来，随着科学技术的进步和工业发展，各领域对液相色谱技术的要求日益提高。首先是随着生产力的不断发展，大批量样品的分析需要在很短的时间内完成，例如代谢组学分析;其次是在生化样品及天然产物样品的分析中，样品的复杂性对分离能力提出了更高的要求等等。因此，一种基于小颗粒填料的液相色谱技术—超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography, UPLC)被研发并成功地应用于各分析行业。

2004年3月,Waters公司率先推出了第一台商品化的超高效液相色谱系统(acquity,UPLCTM)。超高效液相色谱系指一种采用小颗粒填料色谱柱(粒径小于2μm)和超高压系统(压力大于105kPa)的新型液相色谱技术,能显著改善色谱峰的分离度和检测灵敏度,同时大大缩短分析周期,因此特别适用于微量复杂混合物的分离和高通量研究。自问世已来,超高效液相色谱发展很快,现已成功应用于农药残留物检测、水质和环境监测、化妆品质量控制、药物及制剂的分析检测和质量控制、中药复杂组分分析及代谢组学等领域。

曲伏前列素是前列腺素类似物，由美国爱尔康公司（alcon）开发， 2001年在美国上市，迄今已在全球几十个国家上市销售，用于降低开角型青光眼或高眼压症患者升高的眼压，目前是治疗青光眼的一线用药之一，剂型为滴眼液，其结构式如下：

目前关于曲伏前列素滴眼液分析方法的报道不多，其中美国药典usp36收录了曲伏前列素和曲伏前列素滴眼液含量和有关物质的测定方法。两种方法都是采用高效液相色谱分析，以普通的十八烷基硅烷键合硅胶柱为分离色谱柱，紫外检测器检测，检测波长为220nm。

在usp36收录的曲伏前列素原料的测定方法中：曲伏前列素含量和有关物质采用相同的流动相和色谱体系，流动相由乙腈和pH 3.0的磷酸缓冲液组成，乙腈与磷酸缓冲液的体积比为3:7，检测波长：220nm，色谱柱：4.6mm*5cm；packing L1，柱温：25°C，流速：3.0ml/min。该方法所检测的有关物质为：

杂质 A： 曲伏前列酸（Travoprost acid），结构式如下：

杂质 B ：环氧化衍生物，结构式如下：

杂质C ：15（S）曲伏前列素对映异构体，结构式如下：

杂质D ： 5,6反式异构体（5,6-trans Isomer），结构式如下：

杂质E： 15-酮衍生物（15-keto Derivative），结构式如下：

在usp36收录的曲伏前列素滴眼液的测定方法中：曲伏前列素含量和有关物质测定采用两种流动相。曲伏前列素含量以及杂质D（5,6反式异构体，同上）和杂质E（15-酮衍生物，同上）测定时，流动相由乙腈和缓冲水溶液（ 2.18mg/ml辛烷磺酸钠溶液，磷酸调节PH至3.5）组成，乙腈与缓冲水溶液的体积比为17:33，检测波长：220nm，色谱柱：4.6mm*15cm;packing L1，柱温：30°C，流速：2.0ml/min。有关物质A曲伏前列素酸测定时，流动相由乙腈和pH 3.0的磷酸缓冲液组成，乙腈与磷酸缓冲液的体积比为6:19，检测波长：220nm，色谱柱：4.6mm*5cm；packing L1，柱温：30°C，流速：3.0ml/min。