[发明专利]广谱杀虫、抗菌活性的链霉菌株T2-10及其应用

说明书

技术领域：

本发明涉及微生物及其应用领域，特别是涉及一种新的具有广谱杀虫和抗菌活性的链霉菌株，本发明还涉及该菌株及其发酵制品在生物农药及生物菌肥等方面的应用。 

背景技术：

从微生物中发现和开发高效、安全、经济、无公害的新型杀虫剂是当今发展的必然趋势，可避免环境污染、害虫抗药性产生、杀伤天敌等严重问题。 

从放线菌筛选生物活性物质一直是微生物药物研究的热点，目前大约有2/3的天然抗生素是来自放线菌。放线菌是土壤中的优势菌群，除极少数致病菌外，大多数放线菌具有重要的生物学意义；其最重要的特性是可以产生多种活性物质，如抗生素、杀虫剂、细胞抑制剂等。 

发明内容：

本发明的目的是提供一种新的具有广谱杀虫和抗菌活性，特别是对小菜蛾、蚜虫、红蜘蛛、小麦孢囊线虫和植物致病真菌具有极强抑制活性的链霉菌株；本发明的直接目的是提供一种新的链霉菌株。 

本发明的另一个目的是提供一种方法，利用该新的链霉菌株生产杀虫、抗菌活性物质。 

本发明人从我国海南省某地区的土壤样品中分离到了一种新菌株：链霉菌（Streptomyces sp.）T2-10（以下简称T2-10），该菌株属于放线菌株，该菌株已于2013年4月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.7449。 

本发明所述的链霉菌T2-10的形态特征和培养特征为： 

菌落密集成褶皱，起初呈象灰色，后变为棕黑色，产生大量可溶性色素；在光学显微镜下，菌丝呈垂直状，0.39-1.07um宽，图1；电镜下观察孢子呈柱形，表面光滑，见图2。 

将T2-10接种到鉴定培养基上培养10天后，观察发现除了在查氏培养基上T2-10生长非常缓慢，菌丝始终呈白色外，在其它鉴定培养基上T2-10气生菌丝和基内菌丝均生长良好，且呈现不同颜色，只在马铃薯块和燕麦粉琼脂培养基上产生可溶性色素，分别呈浅棕黑色和丁香棕色。如表2、图3所示。 

提取此菌的DNA，以27F和1492R为引物，扩增16S rDNA的序列。该16S rDNA序列如SEQ ID NO:1所示。 

将该序列进行Blast比较，与链霉菌属（Streptomyces sp.）菌株的同源性最高，相似性均大于99％，系统进化树分析表明T2-10与Streptomyces sp.KACC91020亲缘关系最近，如图4。 

结合菌株形态观察、培养特性及16S rDNA的鉴定结果，参照《链霉菌鉴定手册》初步鉴定T2-10为链霉菌属中的吸水紫类群。 

T2-10具有广谱的杀虫和抗菌活性，特别是对小菜蛾、蚜虫、红蜘蛛、小麦孢囊线虫和植物致病真菌具有极强抑制作用。该菌株在生产生物农药和生物菌肥方面具有极大的应用潜力。 

本发明所述的利用链霉菌T2-10生产抗菌活性物质的方法，是将链霉菌T2-10接种到筛选培养基中培养，得到含有抗菌活性代谢产物的培养液。 

所述筛选培养基包括碳源、氮源、无机盐和水。 

其中，所述碳源选自下述化合物中一种或几种：燕麦粉、淀粉、黄豆饼粉、大米粉、可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖； 

所述氮源选自下述化合物中一种或几种：酵母粉、蛋白胨、硝酸钾、酪蛋白、牛肉膏； 

所述无机盐选自NaCl、K₂HPO₄、MgSO₄、CaCO₃，所述NaCl的终浓度为1.0g/L，K₂HPO₄的终浓度为1.0g/L，MgSO₄的终浓度为0.5g/L，CaCO₃的终浓度为3.0g/L； 

所述水是无污染的清洁水，来源不限，如可为蒸馏水、自来水或井水等。 

所述碳源及在液体筛选培养基中的终浓度优选：可溶性淀粉10g/L、黄豆饼粉5g/L、葡萄糖5g/L。 

所述氮源优选酵母粉，终浓度优选5g/L。 

以上所述碳源、氮源和无机盐的浓度均为在1L水中的含量。 

所述链霉菌T2-10的接种量无特别限制，一般为10⁵～10⁷个孢子/mL培养基。 

所述培养温度是25～29℃，优选28℃。 

所述培养方式是：可以150～260rpm的转速振荡培养2～5天，也可静置培养3-10天。