[发明专利]一种铁皮石斛茎段组培育苗法

说明书

技术领域

本发明涉及种苗生产技术领域，具体涉及一种以铁皮石斛茎条为材料的组培育苗方法。

背景技术

铁皮石斛为兰科附生植物，主要分布于江西、广西、广东、贵州、云南、安徽、浙江、湖南、陕西、河南、福建等地，其生境独特，对小气候要求十分严格，常生长于海拔500～1500米之间，附生在悬崖峭壁上或阔叶树的树干上以及石灰岩上，喜温暖、湿润、半阳的环境。在野生状态下，铁皮石斛繁殖速率低、生长缓慢，加之掠夺性采挖，使其野生资源日益减少，远远不能满足国内外市场经济发展和临床医学的需要，因此铁皮石斛人工种植的规模迅速扩大。铁皮石斛种子极其细小、自然成活率低，因此培育大量石斛种苗是人工栽培时必须解决的第一个问题，现在铁皮石斛种苗生产方式主要通过组织培养方法解决。

铁皮石斛组培育苗现在一般采用铁皮石斛蒴果经消毒后将种子播种于MS培养基中催芽-圆球茎分化增殖-诱导出芽-诱导出根-炼苗-驯化的过程，该方法效率高，为大多数生产铁皮石斛种苗的企业所采用；但是由于利用种子作为繁殖材料，属于有性繁殖方式，不可避免的会出现基因不纯，种苗混杂的现象。另外也有报道选取铁皮石斛茎段为外植体通过诱导出芽进行增殖的报道，但由于增殖率不高，效率太低，致使该培养方式基本局限于研究单位研究之用，得不到生产上的应用。

例如，申请号为200810058316.0的发明，公开了一种铁皮石斛优质种苗快速繁殖方法，其方法为：(1)取铁皮石斛未展开叶新芽，经灭菌将茎尖接种到固体培养基，建立无菌体系；(2)切取无菌体系幼苗的茎段或基部小组织块，在适宜的激素组合和培养基上，诱导出原球茎；(3)原球茎在液体和固体继代增殖培养基上交替培养，快速增殖形成原球茎团；(4)将原球茎团切开，转接到固体成苗培养基上分化植株，形成小苗；(5)将小苗转接到固体壮苗培养基上壮苗、生根，培育出完整的植株；(6)将无菌壮苗定植至适宜的炼苗基质中，获得优质种苗。本发明可用于大规模工厂化生产，具有外植体去污率高、增殖率高、变异率低、种苗粗壮、品质好、移栽后成活率高、生长势强等优势。但是，该发明公开的技术方案，继代增殖、幼苗培养、成苗培养、壮苗生根培养阶段，五次移苗，需要不同的培养基，培养的效率低、工作人员的劳动量大。而且原球茎的继代增殖需要经过液体和固体增殖培养基上交替培养，工序麻烦。

申请号为200910154225.1的发明，公开了一种铁皮石斛种苗的组织培养的光调控方法，其特征在于铁皮石斛种苗的组织培养过程中，以LED植物生长照明系统作为光源实施光照处理，种子萌发阶段光质为白光、光强为10-15μmol·m^-2·s^-1、光照时间12小时/天；种苗生长的第一阶段为从胚形成胚芽后的第1天至第30天，光照处理选用光质为红光，光强为45-50μmol·m^-2·s^-1；第二阶段为胚形成胚芽后的第31天后，光质选用红、蓝混合光，红光∶蓝光为4∶1，光强为45-50μmol·m^-2·s^-1。

发明内容

本发明的目的是提供一种铁皮石斛茎段组织培养的方法，该方法在于茎段培养过程中改变接种方式，结合培养基的调整，使茎段培养增殖率达到4以上，解决了茎段培养中增殖率不高的问题。

为解决上述技术问题，本发明公开了一种铁皮石斛茎段组培育苗法，所述铁皮石斛茎段组培育苗法的步骤为：

(1)消毒：将当年生新鲜铁皮石斛茎条用干净的剪刀剪切下来，然后用消毒水冲洗干净、并吸干茎条上的水珠，再用75％酒精浸泡消毒1分钟，捞起晾干待用；再将所述铁皮石斛茎条在超净工作台上用0.1％升汞消毒10分钟，然后再用无菌水清洗三次；

(2)诱导出芽：将消毒好的所述铁皮石斛茎条切成两个茎段节间的茎段，并接种于1/2Ms+6-BA1.0mg/L+NAA0.3mg/L+10％马铃薯+30％蔗糖的培养基中培养诱导出芽，培养温度为25℃，光照强度为2000Lx，光照时间为12小时，培养40天后，所述茎段节间开始萌发出侧芽，培养60天后，所述侧芽能长高到1～2cm；

(3)侧芽培养：将所述侧芽挖切下来接种于1/2Ms+NAA0.3mg/L+10％马铃薯+30％蔗糖的培养基中，培养60天后，所述侧芽就可以继续长高到4～5cm、并且带有4～5个茎间；