[发明专利]一种高效液相色谱峰保留时间预测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高效液相色谱峰保留时间预测方法，属于高效液相色谱检测技术领域。

背景技术

中药多指标成分的含量测定、指纹图谱分析，化学药（或抗生素）的有关物质检查等工作中一个核心任务就是对数量众多的目标化合物进行定性，如果均使用纯的化学对照品，将给标准物质的制备和供应带来极大的困难，也会显著提高检测成本。因此使用少量化学对照品通过某种方法来对其他色谱峰进行定性，具有重要的意义和应用价值。

目前，使用一个化学对照品的相对保留时间法是最常用的色谱峰定性法，在欧美及中国药典中广泛用于有关物质检查，替代模式的多指标含量测定研究中也多使用。但由于色谱仪与色谱柱的差异，保留时间的预测值与实测值之间的偏差常常较大，实际应用中需限定色谱柱的型号，或选择同类型、分离性能相似的色谱柱，多有不便。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种高效液相色谱峰保留时间预测方法，通过两个化学对照品进行色谱峰定性，较之相对保留时间法，该方法能够显著减小定性的误差，增加使用的色谱柱数量。

为达到上述目的，本发明提供了一种高效液相色谱（HPLC）峰保留时间预测方法，可以称为双标线性校正法，其包括以下步骤：

（1）利用高效液相色谱仪测定各种样品的各种成分在多根不同的色谱柱上的实测保留时间，对在不同色谱柱上测定的同一样品的各种成分的实测保留时间两组两组地进行线性拟合，分别绘制标准曲线并计算相关系数r，剔除（色谱柱测定的）r＜0.995的实测保留时间、（色谱柱测定的）偏离较大的实测保留时间以及（色谱柱测定的）导致色谱峰顺序改变的实测保留时间，以剩下的色谱柱测定的实测保留时间的平均值作为各种成分的标准保留时间；

或者，以在所有色谱柱上测定的同一样品的同一成分的实测保留时间的平均值为初拟标准保留时间，以所有成分的初拟标准保留时间与所有色谱柱上测定的同一样品的所有成分的实测保留时间分别进行线性拟合，分别绘制标准曲线并计算相关系数r，剔除（色谱柱测定的）r＜0.995的实测保留时间、（色谱柱测定的）偏离较大的实测保留时间以及（色谱柱测定的）导致色谱峰顺序改变的实测保留时间，以剩下的色谱柱测定的实测保留时间的平均值作为各种成分的标准保留时间；

（2）在每一个样品的目标成分中选择两个成分作为该样品的双标对照成分；

（3）在一根色谱柱上运行待测样品的供试品溶液和双标对照成分的对照品溶液并利用高效液相色谱仪进行检测，获得供试品溶液的色谱图，通过双标对照成分的对照品对所获得的色谱图中的色谱峰进行定性，获得双标对照成分在供试品溶液中的实测保留时间；

（4）以双标对照成分的标准保留时间为纵坐标、实测保留时间为横坐标建立线性曲线，并得到两点线性方程；

（5）将除双标对照成分之外的待测样品的目标成分的标准保留时间带入所述两点线性方程，获得相应目标成分的预测保留时间，根据该预测保留时间对供试品的色谱图中的其他色谱峰进行定性，得到相应目标成分的实测保留时间；

如果所有的除双标对照成分之外的待测样品的目标成分的标准保留时间和实测保留时间的偏差的绝对值均＞t₂，则预测失败，更换步骤（3）中的色谱柱，并重复步骤（3）-（5）；

如果除双标对照成分之外的待测样品的目标成分之中至少有一个目标成分的标准保留时间和实测保留时间的偏差的绝对值≤t₂，则进入步骤（6）；

（6）以所有实测保留时间与预测保留时间的偏差的绝对值≤t₂的目标成分与双标对照成分的标准保留时间为纵坐标、实测保留时间为横坐标建立多点关系曲线并得到多点线性方程；

（7）将除双标对照成分之外的待测样品的目标成分的标准保留时间带入多点线性方程，计算得到相应目标成分的新的预测保留时间；

（8）在供试品的色谱图中找到与新的预测保留时间最接近的色谱峰，得到相应目标成分的新的实测保留时间，并计算各个目标成分的新的实测保留时间与新的预测保留时间的偏差的绝对值，以判断多点线性方程是否包括了所有目标成分：如果所有的偏差的绝对值≤t₂，则进入下一步骤，如果有偏差的绝对值＞t₂，则返回步骤（6），以步骤（8）中计算的所有偏差的绝对值≤t₂的目标成分与双标对照成分的标准保留时间为纵坐标、实测保留时间为横坐标重新建立多点关系曲线并得到新的多点线性方程，重复步骤（6）-（8）；