[发明专利]干细胞小球诱导培养液及干细胞小球培养方法

权利要求书

1.一种干细胞小球诱导培养液，其特征在于：所述诱导培养液是按以下配比的原料制成的，将氯化钴142.758-285.516 mg，紫杉醇2.135-4.27μg ，胎牛血清100-200ml，双抗生素10ml, 室温下混合于EMEM培养基中至1000ml，经0.2μ的过滤器过滤、灭菌制成。

2.根据权利要求1所述干细胞小球诱导培养液，其特征在于：所述诱导培养液是按以下配比的原料制成的，将氯化钴氯化钴214.137mg，紫杉醇2.989μg，胎牛血清100ml，双抗生素10ml, 室温下混合于EMEM培养基中至1000ml，经0.2μ的过滤器过滤、灭菌制成。

3.权利要求1所述一种干细胞小球培养方法，其特征在于：

a.体外原培养液培养的细胞生长至融合度达到90%，改用混合培养液培养，并在二氧化碳培养箱中第一次缺氧培养12-96小时，直至90%的细胞发生死亡；所述混合培养液是按原培养液:干细胞小球诱导培养液为2:1的混合而成；

b.待贴壁的培养细胞约只剩下10%时，去除含有死亡细胞的培养液，贴壁细胞经1×PBS洗涤2次，加入原培养液继续培养3-10天，使剩下的贴壁细胞重新增殖，待增殖的细胞密度达到90%后，重新更换混合培养液，并进行第二次缺氧培养，贴壁细胞洗涤后，原培养液中再次增殖，细胞密度达到90%，收集悬浮的干细胞小球。

4.根据权利要求3所述干细胞小球培养方法，其特征在于：第二次缺氧培养后，贴壁细胞洗涤，原培养液中再次增殖，待细胞密度达到90%后，移去培养瓶中的原培养液，经磷酸盐缓冲溶液洗涤后，用0.5%-2.5%胰酶消化细胞，然后再加入不含血清的原培养液继续培养细胞12小时，在培养瓶中收集悬浮的干细胞小球。