[发明专利]一种微囊包被卵黄源胆囊收缩素抗体的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及兽用生物制品的研制，制备一种微囊包被的反刍幼畜用促生长饲料的添加剂。 

背景技术

胆囊收缩素（CCK）是一种重要的胃肠道多肽激素，CCK在胃肠道的主要作用是促进胆囊收缩及胰酶分泌，促进胰腺细胞生长，同时它被认为是一种重要的内源性生理饱感因子，参与摄食和体重调节，通过免疫中和技术，能部分消除内源性CCK引起的饱感作用，促进摄食，从而促进动物生长。卵黄抗体(IgY)是当前备受关注的生物制品，广泛应用于人类和动物的疾病防治、诊断和治疗。但是IgY在极强胃酸环境中易被腐蚀而分解失活，制约其在口服制剂中的实际应用，加之，反刍动物消化道结构功能较复杂，内部微生态环境中的微生物、酶的种类和功能更加多样，使得常规的口服制剂若不经过特殊处理，易在消化道内降解，从而减弱其生物学活性甚至完全消失。 

文献检索披露：Smith和Gibbs首次报道，外源性CCK可以抑制动物摄食行为。CCK不但可以降低大鼠的采食量，而且还可以改变大鼠的摄食行为。Baile等研究报道，提取的CCK及人工合成的CCK-8均可以抑制真饲和假饲时动物的采食。CCK不但没有推迟或阻止摄食，而是缩短了动物每餐的摄食间隔及减少了摄食量，而且还表现出来正常的饱感行为。研究CCK影响反刍动物的生产性能的报道较少且存在分歧。Trout等对公羊主动免疫CCK-8，研究其对公羊胴体和采食量的影响，结果表明，CCK-8主动免疫公羊可以产生较高的抗体，并降低了动物胴体的脂肪含量，但是对胴体质量、平均日增重和采食量差异没有达到显著水平。 

本发明利用微囊化技术，保护卵黄源胆囊收缩素抗体在胃酸环境中的口服活性，同时，保证IgY在胃中不释放，而在小肠中快速、持续的释放出完整的卵黄源胆囊收缩素抗体,从而发挥其生物学作用。 

发明内容

本发明目的在于：研制的微囊包被的卵黄源胆囊收缩素抗体（CCK-IgY），用于反刍幼畜用促生长饲料的添加，效果极佳，具有重要的使用价值。 

本发明目的是这样实现的：一种微囊包被卵黄源胆囊收缩素抗体的制备方 法，分步实施； 

步骤1胆囊收缩素抗原复合物的制备：将0.5mg CCK-8与6.5mg牛血清白蛋白溶于20ml0.1M PBS、pH7.0中，逐滴加入5ml戊二醛，室温搅拌4h，在4℃下用8000-14000Da的透析袋在pH7.0的0.005M PBS中进行充分透析过夜；上述混合物需透析3天，每8小时换液一次；取10ml CCK-BSA交联复合物加等量的弗氏完全佐剂乳化，乳化后，配成含抗原复合物的油包水型油乳疫苗。 

步骤2卵黄源胆囊收缩素抗体制备：将鸡蛋用6ml/L新洁尔灭浸泡20min后，取出晾干，在无菌条件下，分离蛋黄，取卵黄液与去离子水1:9混合，pH调至5.2，4℃反应过夜，在12000rpm,20min,4℃条件下离心，弃沉淀；上清过滤，加饱和硫酸铵至终浓度300g/L，在12000rpm,20min,4℃条件下离心，弃去上清，PBS溶解沉淀至原抗体水溶液体积的1/2，加饱和硫酸铵至终浓度190g/L，将上述混合物混和均匀，在12000rpm、20min、4℃条件下离心，弃上清液，用少量0.1M PBS溶液溶解沉淀，透析20-48h,每8h换液一次，4℃保存待用； 

步骤32.5%的海藻酸钠水溶液配制：称取2.5g海藻酸钠溶于100ml去离子水中，用磁力搅拌器搅拌至溶解，待用； 

步骤4成囊溶液的配制：称取10g壳聚糖，加10%醋酸搅拌溶解，加去离子水稀释至1L，配制成1%壳聚糖溶液，其中成囊溶液的pH为4.5-6.5；使用前，将1%壳聚糖溶液稀释成0.4%壳聚糖溶液，并加入3%CaCl₂使之溶解，真空脱气，待用； 

步骤5将卵黄抗体液1-4：1缓慢加入到步骤3的海藻酸钠水溶液中，在高速匀浆机中均质乳化30min； 

步骤6将步骤5制成的卵黄抗体液与海藻酸钠水溶液滴入到步骤4成囊溶液中进行包被，滴加速度30r/min，磁力搅拌器上反应28-32min，用去离子水洗净自然晾干，获得微囊包被的卵黄源CCK抗体产品。