[发明专利]一种17-羟皮质类固醇的比色测定方法

说明书

技术领域

本发明属于临床检验领域，特别是涉及一种尿液中17-羟皮质类固醇的比色测定方法。

背景技术

17-羟皮质类固醇为尿中由肾上腺皮质所分泌的激素及其代谢产物，主要有皮质醇、四氢皮质醇、皮质素、四氢皮质素等。17-羟皮质类固醇含量可以反映肾上腺皮质分泌皮质醇的情况，有助于某些内分泌疾病的诊断。

目前常用的17-羟皮质类固醇的检测方法为比色测定法。该方法原理为：在酸性条件下，尿液中的17-羟皮质类固醇与盐酸苯肼作用，生成黄色苯肼衍生物，此结果减去硫酸与其它非17-羟皮质类固醇显色物所产生的空白颜色，与标准液同样处理比色即可求其含量。该方法检测步骤包括：（1）采集受检尿液；(2)抽提17-羟皮质类固醇样品；（3）制备比色测定试样；(4)进行显色反应；（5）比色，读取吸光度，根据吸光度计算17-羟皮质类固醇含量。

上述检测方法中需用到三氯甲烷--正丁醇混合液进行抽提，该试剂具有麻醉作用及刺激性，是可疑致癌物，并且在光的作用下能被空气中的氧氧化成氯化氢和有剧毒的光气，给操作人员及环境带来危害。

发明内容

为了解决现有技术的问题，本发明实施例提供了一种临床检验标本的降粘方法。所述技术方案如下：

提供了一种17-羟皮质类固醇的比色测定方法，所述方法包括：

在受检尿液中加入色素吸附剂，所述色素吸附剂的加入量为0.1-0.7g/ml尿液,然后振摇、分离，留取清液用于制备所述受检尿液的测定样，所述色素吸附剂在所述受检尿液中的停留时间为4-12min；采用分光光度法测定吸光度，根据所述吸光度计算17-羟皮质类固醇含量。优选，所述的色素吸附剂为丙烯酸系树脂。

具体的，收集受检者24h尿液，向所述尿液中加入5-10ml浓盐酸，得所述的受检尿液。

具体的，所述方法包括：受检尿液预处理：取5ml受检尿液放入10ml具塞器皿中，加入0.1ml质量分数为56%的硫酸溶液，混匀，然后加入1g色素吸附剂，振摇3min，在3000r/min下离心5min，留取上清液用于制备所述受检尿液的测定样；制备所述测定样及其他比色测定所需试样；对所述测定样和其他所述试样进行显色反应；测定所述测定样和其他所述试样的吸光度，根据所述吸光度计算17-羟皮质类固醇含量。

具体的，所述的测定样，由1ml所述上清液、1ml无水乙醇及2ml质量分数为56%的硫酸溶液组成；所述的其他比色测定所需试样，包括：空白样，由1ml蒸馏水、1ml无水乙醇及2ml质量分数为56%的硫酸溶液组成；试剂空白样，由1ml蒸馏水、1ml无水乙醇及2ml盐酸苯肼硫酸液组成；标准样，由0.05ml氢化可的松标准品、1ml蒸馏水、1ml无水乙醇及2ml盐酸苯肼硫酸液组成；以及测定空白样，由1ml所述上清液、1ml无水乙醇及2ml质量分数为56%的硫酸溶液组成。

具体的，所述的盐酸苯肼硫酸液，其制备方法包括：称取盐酸苯肼65mg，溶于100ml质量分数为56%的硫酸溶液中，加入氯化钠2g即得。

进一步的，所述的盐酸苯肼通过以下方法精制而成：称取分析纯盐酸苯肼10g，放入400ml无水乙醇中，隔水加热至溶解，得混合溶液；将所述混合溶液冷却至室温后置冰箱冷藏室内1-2小时，析出结晶；用布氏漏斗过滤出所述结晶，将滤液重新放回冰箱冷藏室重复上述结晶、过滤步骤2-3次，直至无水乙醇无色，得到白色晶体；在37°C下烘干所述白色晶体，并保存于棕色瓶中备用。

具体的，所述显色反应的条件为：56℃下温浴45min。

所述的测定所述测定样和其他所述试样的吸光度，根据所述吸光度计算17-羟皮质类固醇含量，具体包括：所述测定样和其他所述试样显色后冷却至室温，取适量试液在410nm波长下进行比色，读取吸光度。

进一步的，受检者在收集尿液的前三天不使用改变体内17-羟皮质类固醇含量的药物及影响显色的药物。本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：

不含三氯甲烷、氯仿等有毒试剂，操作过程安全可靠，无需使用无水硫酸铵及无水硫酸钠，节约试剂；

用受检尿液制备备用试液的步骤简单易操作，大大节省了测定时间。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但不作为对本发明的限定。

实施例1

提供了一种17-羟皮质类固醇的比色测定方法，具体包括以下内容：

测定所用试剂：