[发明专利]替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂有关物质的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂有关物质检测方法，属方法学领域。 

背景技术

兽医临床实际中往往通过联合用药使不同药物获得协同或相加作用，从而提高疗效，减少用量，降低或避免毒性反应，减少细菌耐药性的产生。这使得复方药物的研究应用在兽药领域越来越受到关注。替米考星是大环内酯类药物，是繁殖期抑菌剂，属于快速抑菌剂，磺胺类药物是静止期抑菌剂，是一种慢效抑菌剂，二者合用能够扩大抗菌谱，并有相加的作用，在临床中有很大的运用基础。按照国家有关规定，对于复方制剂必须按照新兽药申报，所以，需要进行该复方制剂的有关物质研究。在中国兽药典（2010年版）中，替米考星的有关物质用高效液相色谱法进行检测，磺胺二甲嘧啶的有关物质用薄层色谱法检测。基于薄层色谱法不适于杂质的定量研究，所以采用高效液相色谱法进行杂质的检测。但是如果完全参照药典中关于替米考星有关物质的方法进行检测，发现顺反式替米考星杂质峰未能达到基线分离，且拖尾严重，图谱见说明书附图1，而同时检测替米考星、磺胺二甲嘧啶钠的方法尚无研究，因此开发新的检测替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂中有关物质的检测方法，已达到能将制剂中的杂质完全、准确的检出的目的。 

《中华人民共和国兽药典》（2010年版一部）替米考星项下的有关物质检测方法如下：取替米考星约0.2g，精密称定，置50ml量瓶内，加乙腈10ml超声处理使溶解，用磷酸溶液（取水900ml，加磷酸5.71g，用12.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至2.5±0.1，加水至1000ml）稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取替米考星对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1ml中含0.25mg的溶液，精密量取5ml，置25ml量瓶中，用上述磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（附录36页）试验，用十八烷基键合硅胶为填充剂；以水-磷酸二丁胺溶液[取二丁胺16.8ml，加磷酸溶液（1→10）70ml，边加边搅拌，放冷后，用磷酸调节pH值至2.5±0.1，加水至100ml]（975:25）为流动相A，以乙腈为流动相B；按下表1进行梯度洗脱；检测波长为280nm；流速为每分钟1.1ml。替米考星反式异构体（两个不完全分开的峰）的相对保留时间为0.8，替米考星顺式异构体的相对保留时间为1.0，替米考星顺式-8-差向异构体的相对保留时间为1.2。精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中（除顺式、反式和顺-8-差向异构体外）如有杂质峰，以无水物计算，单个杂质不得过3.0％，各杂质的和不得过10.0％。供试品溶液色谱图中任何小于对照品溶液顺式异构体峰面积0.01倍的峰可忽略不计。 

表1 梯度洗脱程序 

本发明参照上述方法，但又在上述方法上有所提升。 

本发明在确定之前，详细分析了替米考星、磺胺二甲嘧啶及其钠盐的杂质。磺胺二甲嘧啶及其钠盐的主要杂质为氨苯磺胺，氨苯磺胺用本发明测定时得到的色谱图见附图2，图3为加入了1%氨苯磺胺的替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂样品，图4为替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂样品。通过比较我们可以判断复方制剂中保留时间为4.9min左右的物质中为氨苯磺胺，即氨苯磺胺可以成功分离出来。 

参考《兽药杂质分析指导原则》，替米考星、磺胺二甲嘧啶复方制剂采取主成分自身对照法，对有关物质进行限定，将供试品溶液稀释为2.5mg/mL，将供试品溶液稀释100倍作为对照品溶液，将供试品溶液的色谱图去除磺胺二甲嘧啶钠、替米考星反式异构体、替米考星顺式异构体、替米考星顺-8差向异构体后，将剩下的杂质峰进行峰回归（表2所示），分别计算氨苯磺胺、最大单一杂质和总杂质含量。 

表2 供试品中各杂峰归属分析